Métodos Separativos -Clase 9 - GC equipo básico

Hola, buenas tardes. Espero que todos estén bien. Les vamos a comenzar la clase de hoy con la información correspondiente. Y voy a cancelar, ahora sí, lo que es la la presentación. Se llama el videoo, colocar pantalla completa, que podamos como estamos adendo clase. Las coras Queen es el concepto, la herramienta de cromatografía gaseosa. En esta clase vamos a hablar básicamente de lo que es el equipo básico, las columnas, gases, temperatura de flujos.

Esta imagen lo que pretendo mostrarles a ustedes es que todo lo que han visto es absolutamente, es absolutamente válido. Sáficos, independientemente sea líquido y otros se basan en una teoría que comparten. De hecho, si bien históricamente la cromatografía gaseosa se desarrolló instrumentalmente en primer término, fue realmente la cromatografía líquida la que sirvió de referencia para toda la teoría que estamos aplicando hoy para ambos sistemas cromatográficos. Esto significa de que, eh, si bien nosotros lo que vamos a hacer en esta, en esta presentación, va a ser hacer en primer lugar una revisión, ¿verdad?, de lo que ustedes, unos conceptos que ustedes ya vieron para entender que se, cómo eso se va transfiriendo a cromatografía gaseosa en forma espontánea. Y todo lo que vieron tiene exactamente, eh, la la misma validez teórica que vamos a utilizar.

Esta primera, esta imagen lo que muestra es algo que a mí me interesaría mucho que ustedes vieran. Es decir, recurran a este link. Esto es un video, muy, mi punto de vista o de nuestro punto de vista, en realidad, tiene que ver con las características instrumentales, partes, las variables que se utilizan para cromatografía gaseosa. Fue desarrollado por el Consejo Superior de Científica en España y realmente, eh, vale la pena verlo. Lo sugiero y lo estimo.

La frase de abajo tiene como sentido decir de que, si bien nosotros vamos a compartir toda la parte instrumental que es la cromatografía en términos genéricos, siempre recuerdo lo siguiente: es en la práctica donde realmente uno encuentra algunas, como diríamos, algunas cosas que lo hacen dudar de lo que creían. Créanme, estimula a todos que puedan estudiar, utilizar equipamiento, que tomen alguna, aunque estén trabajando en un lugar donde no les permitan hacer demasiadas cosas, donde tengan técnicas desarrolladas, metodologías aplicables. Tómense siempre un tiempo de observación y eventualmente de hacer alguna modificación menor que no afecte el trabajo que ustedes tienen que hacer para observar qué ocurre. Porque efectivamente, eh, luego de muchas discusiones en muchos lugares acerca de que la teoría es útil y es lo único que es útil y la práctica simplemente una aplicación, al revés, que la gente que dice que a través del uso de un instrumento, la teoría en realidad no le, no le aporta. Los dos conceptos son válidos. El hecho de no usar un equipo pone dificultades para poder entender determinadas cosas. Eso es evidente. Difícil aprender a andar en bicicleta sin bicicleta. Sin embargo, conocer la teoría, ¿verdad?, acerca de cómo funciona y por qué funciona, ayuda muchísimo para poder entender y, sobre todo, para cambiar la realidad de una, una situación. Sea eso un cambio de programas, un cambio de equipos. Todos los equipos son diferentes, pero hacen más o menos lo mismo, exactamente lo mismo si son de la misma generación, ¿verdad? Por lo tanto, estimulo también a, a un uso inteligente de los equipos, es decir, conociendo qué es lo que ocurre y, al mismo tiempo, a los que, a los que no tengan esa oportunidad en forma inmediata, que cuando la tengan, la aprovechen.

Bueno, dentro de la parte de revisión que queremos ver, tenemos este cuadro de trabajo. No dice nada nuevo, pero de alguna manera, ¿verdad?, nos hace una reflexión genérica acerca de lo que vimos y lo que vamos, y teoría, lo que vamos a dar. Cuando nosotros enfrentamos a hacer un determinado tipo de trabajo, tenemos que identificar uno, ¿verdad?, en este caso y en este contexto, se refiere a qué tipo de información se requiere, ya sea por la técnica que estamos aplicando en un determinado lugar o por lo que queremos resolver para obtener determinado tipo de resultado: cualitativo, cuantitativo, de caracterización, o sea, perfiles de reacción, que fue y que eso sea hecho en un contexto del problema. Si se trata de un sistema que yo estoy aplicando en forma rutinaria porque tengo una metodología desarrollada y solamente tengo que adaptar el equipamiento que yo tengo disponible, porque nunca, eh, es muy difícil que tengamos justamente todo para lo que fue realizado. De hecho, la, si ustedes buscan sistemas metodológicos en algunos de los, digamos, documentos formales que se utilizan, ¿verdad?, no se menciona el equipo, se habla de las características y de las condiciones experimentales. Lo mismo se puede decir para la gente que trabaja o trabajará en investigación o en desarrollo, en el cual, ¿verdad?, aunque tenga el estado del arte en equipamiento, instrumentación, probablemente para el que le están desarrollando la técnica o para el que ustedes están trabajando en investigación, puede tener el mismo, menos sofisticación o mayor sofisticación.

Segunda parte importante es el diseño experimental, es decir, establecer en primer lugar el criterio de diseño, ¿verdad?, es decir, qué nos requiere dentro de lo que estamos haciendo el método instrumental: actitud, precisión, escala de operación, sensibilidad, selectividad, costo, velocidad. Una cosa es hacerlo para una técnica que nosotros tenemos que aplicar, o sea, que alguien ya entendió, ¿verdad?, en nuestro trabajo que esa es la herramienta. Hay una cantidad de criterios como costo, velocidad y demás que ya están establecidos. Si se aplica una técnica que ya fue desarrollada, ¿verdad?, seguramente los demás criterios también se cumplen. No así para desarrollo y lo mismo ocurre para investigación, es decir, es muy, muy común decir que la gente que trabaja en investigación tiene toda disponibilidad y el costo no lo toma en cuenta, que tener toda disponibilidad, todo el mundo sabe que no es así y que no toma el costo en consideración tampoco, porque muchas veces, ¿verdad?, sí, la mayor parte de las veces no hace trabajo de investigación, lo que está haciendo es tratar de resolver un problema para el cual tiene un sistema de acotado por proyecto, por financiamiento, por lo que sea. O sea, que los costos también se toman en cuenta.

También es importante identificar si existen interferentes, ¿verdad? Recuerden que nosotros estamos trabajando con, eh, cómo se llama, con compuestos volátiles en este caso, por lo tanto, los compuestos volátiles requieren tener mucho cuidado porque efectivamente en los sistemas de muestreo es muy difícil ser selectivo en cuanto a los volátiles que me interesan y los volátiles que no me interesan. De hecho, muchas veces los que no me interesan me sirven de alguna manera como referencia para validar o verificar un determinado momento.

Seleccionar el método a ser utilizado, o sea, dentro de toda la parafernalia de técnicas, información publicada, artículos y demás, tenemos que tener en cuenta aquellos que realmente nos dan útil o que nos dan una pista cuando estamos trabajando, ¿verdad?, por ejemplo, en el de los casos.

Establecer un criterio de validación. Esto es obvio para quien trabaja en el área analítica y también es obvio para quien trabaja en el área de, quiero que lo que yo hago, el primero me sirva a mí, repetir y útil para lo que y quiero hacer. Por otro lado, si lo quiero publicar, voy a, alguien lo va a tener que repetir, o sea, que un par me lo va a leer, un par académico lo va a leer y va a entender si eso es repetible o no, y va a verificar que algunas cosas estén bien o estén mal. Y lo mismo si estoy haciendo desarrollo, desarrollo una técnica.

Y establecer la estrategia de muestreo. O sea, esto que parece realmente obvio, no lo está. Todo sistema analítico, todo sistema, particularmente cromatográfico o especialmente cromatográfico, ¿verdad?, donde yo puedo trabajar con sensibilidad de resolución muy alta, puedo, puedo, puedo trabajar mirando mucho más en detalle lo que estoy analizando. Por lo tanto, ¿verdad?, la muestra tiene que tener características que me permitan asegurar que todo lo demás que yo hago posteriormente va a tener un sentido en la interpretación.

Al paso, obviamente, es realizar el experimento. Y ahí se habla de calibrar instrumentos, estandarizar reactivos, reunir los datos. Los tres elementos son, eh, importantes. En primer lugar, muy poca gente lo que calibra el instrumento que utiliza cromatografía líquida. Esto es un vicio, ¿verdad?, de la técnica, a que creemos lo que nos dicen, ¿verdad?, y en realidad los equipos deben ser calibrados. En primer lugar, porque no, como yo les decía, las técnicas que utilizamos normalmente están, cuando se trabaja en llant cidadas, no mencionan los equipos, ¿verdad? En investigación sí se mencionan los equipos y ahí es porque donde se ve que realmente, ¿verdad?, de acuerdo al modelo, de acuerdo al tipo, de acuerdo a las características, eh, algunas de las variables que utilizó, eh, las condiciones experimentales, eh, varía mucho. Por eso la calibración de los equipos es importante. ¿Cómo se hace? Bueno, se puede hacer de muchas maneras, ya lo vamos a ver.

Estandarizar reactivo. Bueno, esto requiere mayor explicación. Y reunir los datos. Esto realmente sí es importante tener en cuenta. Eh, muchas veces nosotros trabajamos alegremente con los equipos y no registramos, es decir, no guardamos ninguna de estos, eh, información que estamos que estamos viendo, ¿verdad?, ni las calibraciones, ni los utilizando. Y la información queda de repente simplemente en un cromatograma que yo puedo, puede guardar, que tampoco se guardan, pero digamos que guardamos. Con eso yo voy a tener una historia y esa historia va a tener implicancias tanto en lo que tiene que ver con la interpretación de los resultados, con del problema, con el desarrollo de lo que me están pidiendo, pero también con la eficiencia del sistema cromatográfico completo. Esto en cromatografía gaseosa, también en líquida, obviamente, pero cromatografía gaseosa, que tiene un poco más de factores que producen variabilidad, es extremadamente importante porque yo puedo ver el envejecimiento de mi equipo, de las columnas, las características de los, de las fases móviles, cómo están las fases estacionarias, en fin, eh, como este sistema de calefacción, ¿verdad?, eh, una muestra de calibración, cómo está funcionando. Es decir, todo ese tipo de información, registren, guarden, tengan el tiempo suficiente para que no, no les genere una ni ansiedad ni tener que repetir todo. Problema de calidad está establecido en estos criterios, sumado a el análisis de los datos.

Y ahí se habla de los datos experimentales: reducir o transformar los datos en estadístico, verificar, interpretar resultados. Fíjense a qué se refiere reducir o transformar los datos. En primer lugar, en el caso de, se refiere básicamente a que yo tengo la posibilidad de tener una corrida, ¿verdad?, 100, desde 3, 10, 15, 100, 200 compuestos, porque la sensibilidad de la resolución en cromatografía gaseosa es extremadamente alta. Eso determina de que si a mí lo que me interesan son algunos compuestos y no todo el resto, voy a tener que ocar y centralizar el desarrollo experimental y el trabajo de datos posteriores en esos compuestos. No me interesa, ¿verdad?, trabajar con toda la figura completa del cromatograma cuando esto me puede, tengo que establecer otros criterios, otras precauciones que tienen que ver con ensanchamiento de picos, con este, cómo se llama, con cambios en líneas de base, una cantidad de cosas que me van a afectar la identificación. Si yo solamente, en realidad, lo que me interesa es una determinada zona y no puedo, este, cambiar el método para solamente ver eso, transformar los datos, reducir se refiere a eso, ¿verdad? Decir, ver lo que realmente nos interesa, eh, y no el resto. Esto tiene, como yo digo, implicancias experimentales muy importantes. El hecho, por ejemplo, de que yo me abro una ventana en el cromatograma, la cual a mí me interesa y del resto me puedo olvidar. Entonces, de última, piensen, yo lo que puedo hacer es bajar los tiempos de corrida, eh, como se llama, disminuir los errores en lo que tiene que ver con, eh, integración de picos y demás, los cambios de línea de base, por todo lo que yo le digo, por inferencias y por lo tanto, puedo, eh, automatizar mucho más.

Transformar los datos se refiere a que justamente cuando yo tengo tantos datos, tanta información, si es que a mí me interesa todo, lo que tengo que hacer es considerar todos los factores, eh, asociados a problemas experimentales, experimentales de una manera estadística, para lo cual, que es lo que decía a continuación, para lo cual yo lo que tengo que hacer es armar matrices de composición. El análisis, entonces, se puede referir a un sistema en dos dimensiones, como estamos hablando, en el cual yo básicamente lo que hago es determinar error, eh, puedo determinar desviaciones estándar, puedo hacer, eh, algunos, eh, eh, tratamientos adicionales relativos, en fin, o en el caso de tener mucha información, puedo recurrir a análisis estadístico multivariable, es decir, donde yo justamente correlaciono los, por ejemplo, los mismos compuestos de distintas corridas que vienen de las mismas diferentes matrices, de tal manera de efectivamente verificar la variabilidad asociada, si hay relación entre entre los datos, qué tipo de relación y demás. Y además hacerlo, eh, gráficamente.

Verificar los resultados, o sea, esto simplemente quiere decir que detenerse un segundo a pensar si lo que obtuve es lo que estaba buscando, o sea, si los datos que yo tuve dan respuesta al planteo que me hice inicialmente. Eh, parece tonto, pero no lo es. O sea, yo tengo que tener en cuenta la referencia de, o lo que me piden en rutina, o lo que yo estoy buscando. Tener en cuenta, no hay una premisa en todo el trabajo de cromatografía, eh, por lo menos de mi generación, que decir, una, un cromatograma debe ser repetido para creer en el cromatograma. ¿Por qué? Porque efectivamente los sistemas cromatográficos son muy fieles, pero, eh, muchas veces los equipos, eh, deciden tomar decisiones por su cuenta, eh, y nosotros nos damos cuenta, no, no lo verificamos. Por lo tanto, sí, lo voy a decir de la forma más actual posible: tenemos un sistemas cromatográficos, un sistema de inyecciones automáticos, ¿verdad?, basta que con respaldos de energía por UPS, por lo que fuera, cualquier fallo electrónico, eléctrico en el sistema me va a provocar una perturbación en el instrumento, que no se olviden que el instrumento hoy es en buena medida también un sistema computarizado. Que el instrumento no puede, cuando ya tiene las instrucciones de cómo tiene que hacer la corrida, cuánto tiene que inyectar, en qué programa, qué condiciones de flujo y demás, no puede decidir si la corrida esa estuvo bien o estuvo mal y modificarla. Por lo tanto, nosotros al recuperar resultados tenemos que mirarlos con un poquito de, bueno, interpretación de resultado depende en más ni menos, ver si pude dar respuesta a lo que me planteé o me plantearon o necesito, ¿verdad?, a través de ese análisis cromatográfico.

El quinto punto, en realidad, se refiere al loop, es decir, la interpretación de resultado, establecer si efectivamente pude dar respuesta a la identificación del problema. Esto parece realmente, como diría, excesivo, ¿verdad?, ser cromatografía está complicando la vida. En realidad, se refiere justamente no a que tengas que hacer estos pasos como, como quien dice, una receta. No, la gente que cocina bien tiene una receta de referencia y le pone su toque para sacar resultado. Esto es igual, es decir, yo si tengo en mente estas consideraciones, seguramente salteando pasos o no, ¿verdad?, voy a poder, eh, obtener, digamos, un mejor, una mejor performance, un mejor resultado de lo que quiero hacer, aprovecharlo mejor o, en todo caso, darme cuenta de forma más o menos rápida de la, de un análisis de de riesgos o de lo que fuera que esté haciendo, ver si efectivamente, si no hay algo en el medio que esté haciendo el ruido y, por lo tanto, lo puedo identificar sin tener que repetir todo un protocolo. Y a esto se refiere, ¿verdad?, es decir, cuando se utiliza por primera vez un método analítico, yo diría, aunque se repita, ¿verdad?, resultados que sean cuestionables a tal punto que pueden llegar a ser no ser útiles, ¿verdad? Por lo tanto, lo que dice para evitar, eh, bueno, yo apliqué el método, yo hice lo que me dijiste o hice lo que me dijeron o hice lo que yo decidí hacer, sin embargo, el problema, bueno, eh, hay que tener en cuenta, ¿verdad?, los que hablaban, blancos de reactivos, este, y fundamentalmente para mí en cromatografía, lo más importante que les puedo transmitir es calibrar, ¿verdad?, los equipos en forma.

¿Por qué entonces resultan tan pobres los resultados? Bueno, primero porque no, una no puede no haberse considerado los, la muestra, ¿verdad? O sea, ya hablamos de idad y demás. Fíjense que en cromatografía gaseosa en particular, nosotros tenemos que pasar por un sistema de preparación de muestras, como ya vimos, que toma en cuenta que tomamos todos los compuestos volátiles que nos interesan y seguramente que no nos interesan. Eh, ya hablamos de por qué es importante hacerlo de determinada manera y las consideraciones que hay que hacer. Por lo tanto, en, en cromatografía gaseosa, una muestra no representativa es una situación muy frecuente y es un hecho que nosotros tenemos que tomar en consideración, ya sea para dar respuesta a un problema que plantean o para nuestro propio trabajo, que sea coherente y nos permita llegar a un resultado final razonable, ¿verdad? O cuando hacemos una determinada, repetimos una determinada técnica, sistema. El concepto rutina significa repetición por defecto. Nosotros trabajamos diciendo que es algo aburrido, demás. Puede ser que este, a alguien le resulte aburrido repetir todos los días lo mismo. Eso significa de que también él está protocolizado, él o la está protocolizado. O sea, si vos sos una persona que tenés el conocimiento de lo que está haciendo, siempre vas a tener, ¿verdad?, una visión diferente del propio equipo que, que sí lo hace automatizado y no puede decidir cosas.

Al contrario, una cosa interesante que está aquí es que la precisión del análisis puede sufrir, o sea, puede verse alterado si no se recoge un número suficiente de muestras o si toma muestras de un tamaño incorrecto. Esto es, la trabajamos investigación en volátiles es como algo que deberíamos grabar, ¿verdad?, en las puertas de los cromatógrafos, las tapas de los cromatógrafos, poner carteles de colores, luces, porque es una tentación cuando se trabaja en investigación decidir que una muestra, ¿verdad?, que uno toma representa todo y es la situación. Nosotros que trabajamos metabolismo secundario, tanto en lo que tiene que ver con el manejo de metabolitos en plantas, lo cual significa tener muestras georreferenciadas los lugares, tener identificaciones, el material adecuado, como por ejemplo, trabajando con microorganismos, en lo cual necesitamos que las cepas sean correctas y menos tres repeticiones, porque los microorganismos hacen muy sensibles y hacen cosas locas con mucha facilidad, ¿verdad? Fíjense que la tentación de no hacer esto, que es un engorro, ¿verdad?, es lo mismo que hacer las variaciones estacionales o, por ejemplo, la variación a lo largo del día. Nosotros hicimos estudios circadianos, que son estudios de comportamiento de emisión de volátiles en plantas durante el día, y tenés que estar a las 6, tenés que estar a las 8, tenés que estar a las 10, tenés que estar a las 12 y así sucesivamente, y a veces hasta de noche. Y eso, la verdad, es un poco tedioso. Sin embargo, cuando ves los resultados, la, cómo se llama, lo que al interpretarlos, o te das cuenta realmente de cómo funcionan las cosas y te dan muchas más ideas.

Tomen en cuenta esos aspectos. El número de muestras tiene que ser suficiente como para asegurarse de que yo estoy cubriendo los errores que ya estoy evaluando y que las muestras son de un tamaño adecuado, o sea, ya sea porque yo tengo que trasladar muchas muestras a otros sitios o el caso que yo les comentaba, o si ustedes tienen que, están trabajando con muestras ambientales o que son complejas de tomar, o bien que en un laboratorio están trabajando con productos, hagan el protocolo, lo va, lo va a agradecer.

Eh, obviamente, también dentro de todo esto tenemos que tener en cuenta un criterio, digamos, de practicidad, ¿verdad? Fíjense lo que dice ahí: calidad de los resultados en ordenadas contra esfuerzo en este inversión. Cuando se refiere a inversión, o se refiere solamente a costos de equipamiento, se refiere a inversión en mano de obra, en todo lo que nosotros tenemos que hacer. Hay un valor ideal asintótico, ¿verdad?, y hay uno que es este justo necesario, ¿verdad?, realista, aceptable. Eso también es algo que solamente nosotros podemos decidir y una vez que nos paremos en ese punto, ¿verdad?, es lo cómo lo debemos hacer.

Okay, simplemente para que no se piensen de que, eh, los equipos son, se deben ser idealizados. Fíjense que los problemas instrumentales tienen que ver muchísimo, ¿verdad?, sobre todo con los sistemas de detección. Lo que parece bastante lógico, porque es, eh, ahí se muestra 33 + 740, 51 por. Sumamos el más 51 son 76. De los problemas son consecuencia de los detectores. Es razonable porque es la respuesta que vamos a medir está mediada por un sistema de detección. Pero hay un 23 que es mayor, ¿verdad? Eh, bueno, a los problemas de masa, por ejemplo, tiene que ver con los flujos y presión en cromatografía. Cromatografía líquida, lo hemos visto y ahí aparecen todos los problemas que ya se vieron y se discutieron sobre las fases, viscosidad, necesidad de usar este hornos para cambiar. Aquí cambia completamente la fase móvil. Es un gas inerte, es decir, que no hay una fase móvil activa, no hay interacción con la fase móvil por, eh, sitios activos en la fase móvil. Solamente transporta la muestra gaseosa. Sin embargo, esa presión, la presión o flujo, que son dos, dos manifestaciones del mismo fenómeno, son extremadamente importantes, ¿verdad?, en lo que tiene que ver con velocidad de análisis, deformación de picos, ensanchamientos, eh, en fin, una cantidad de cosas que depende del tipo de detector utilizando.

Bien, de finalmente, cromatografía, ¿qué significa? Es la separación de una mezcla mediante la distribución de sus componentes en el tiempo, espacio y tiempo, en realidad, porque sabemos que los soportes que son las columnas, ¿verdad?, de fase móvil pueden tener distintas longitudes, distintas dimensiones, o sea, me da, me da distribución en el tiempo. Tiempo entre una fase móvil y una estacionaria. La fase móvil, en este caso, es un gas inerte, es decir, que no interacciona para nada con los componentes de la muestra que son gaseosos. La fase estacionaria, ¿verdad?, que podría ser o el material de empacado de la columna o, ¿verdad?, un, un film, ¿verdad?, que se deposita de fase líquida que se deposita sobre las paredes de la columna, que este es el concepto. Uno es que la, la llama tiene que tomar las ideas de gente. En este caso, fue realmente una persona extremadamente importante y yo creo que explica, ¿verdad?, gráficamente y en forma indudable lo que significa cromatografía y particularmente cromatografía, tener hacerlo posible para tener picos separados.

¿Qué significa compuestos separados? La teoría de la cromatografía, ustedes ya lo vieron y parte exactamente, ¿verdad?, de lo que, de lo que se ve en este esquema: un sistema de preparación de muestra, una fase móvil y un sistema de separación que es una columna que puede tener una fase estacionaria. La separación y el registro correspondiente, eh, de la que está eluyendo, ya sea con una toma de muestra, que esto es lo que hacemos en cromatografías líquidas abiertas, abiertas podemos hacerlos en cromatografías líquidas y también podemos hacer en cromatografía gaseosa, solamente es práctico. Pero también es práctico colocar un sistema de detección, que es lo que vemos acá, y traducirlo en un cromatograma. Obviamente, ¿verdad?, esto que era válido cuando yo empecé a trabajar en el siglo pasado, hoy día tiene un, eh, una intermediación muy fuerte acá en lo que tiene que ver con la computadora, ya, ¿verdad?, que yo puedo hacer todo un procesamiento posterior o tratamiento de los datos directamente sin tener que extraerlo.

La cromatografía en general es una técnica analítica, es decir, estamos haciendo análisis, no importa el objetivo, muy importante, muy poderosa, que permite separar una muestra o lo que es extracto de la muestra en sus componentes, a la vez que da un medio para determinar su concentración. Y yo añado e identificar los compuestos que están involucrados. Como hemos visto, la eficacia de esa separación es lo que llamamos resolución, ¿verdad?, entre los distintos picos, que serían las bandas cromatográficas para dos componentes. Recuerden, como ya lo han visto, ¿verdad?, que la resolución siempre se expresa para dos componentes, ¿verdad?, e, en particular, es decir, se toma como referencia componentes para medir la resolución. Es función de, del factor de capacidad del componente, la eficiencia de la columna. La eficiencia de la columna, es decir, que también funciona la columna, se relaciona con factores que provocan que el pico cromatográfico de un componente se ensanche durante la separación. La columna no puede, ¿verdad?, no debe incorporar per se una deformación del pico, de tal manera que los resultados, si se identifica como cuantificación, sean cuestionados.

El factor de capacidad es la medida del grado en que ha sido particionado en la fase estacionaria, es decir, es la capacidad, se refiere a aquella capacidad, la capacidad de esa propiedad de ser más o menos retenida en la fase estacionaria. O sea, de vuelta, ese huevo de la gallina, yo selecciono la fase estacionaria en función de los componentes que estoy buscando o hago una evaluación primaria después en las respuestas o el comportamiento de los componentes en cuanto a la interacción de la fase estacionaria, de sido las condiciones experimentales. Esto es válido solo para cromatografía gaseosa, donde insisto e insistiré, la fase móvil no interacciona con los componentes. La selectividad de una columna para dos componentes, ¿verdad?, está relacionada con sus capacidades. Es una, eh, relativa, como dice ahí, de cómo una columna puede retener los dos componentes.

Escritos, ustedes ya los vieron. Estos términos, ¿verdad?, y digamos, tienen pequeñas modificaciones justamente, sea por el tema de las características de la fase móvil y su participación en esos. La deficiencia de la columna se define en función del número de platos teóricos y lo que es lo mismo, la altura equivalente a un plato teórico. Si uno lo tuviera que medir físicamente, significa qué tan largo, cuánta longitud en la columna ocupa un plato teórico. Por lo tanto, eh, yo tengo un determinado largo de columna y ese sería el número teórico de platos que dispongo. Pero en realidad, esto depende de la mezcla que estoy separando y las interacciones y demás. Por eso es importante la elección de la fase estacionaria de acuerdo a las características de cada tipo de mezclas. La mezcla, porque vuelvo a insistir, la fase móvil no interfiere. Y ahí, este, se mencionan, como ustedes ya han visto, cuáles son los parámetros. Están resumidos, ¿verdad?, en la ecuación de van Deemter, eh, que, eh, en el caso de cromatografía gaseosa para uso de columnas capilares, como vamos a ver, ¿verdad?, hay una serie de factores, factores de difusión, factor de Eddy, que es se distribuye, ¿verdad?, entre las partículas que no se toman en cuenta.

¿Por qué es importante? Esta es la ecuación de van Deemter, inter, donde se mide la altura equivalente a un plato teórico en milímetros en función de la velocidad lineal, digamos, para decirlo, eh, más fácilmente, de flujo de la fase móvil. Fíjense, yo estoy trabajando con gases. Las fases móviles que se utilizan frecuentemente son nitrógeno, helio o hidrógeno. ¿Verdad? Así es como se determina. Y fíjense que la idea es la que se muestra en la figura de la derecha, es decir, tratar de que la altura del plato teórico varíe lo menos posible con las condiciones de, eh, la lineal, o sea, el flujo que yo utilizo. ¿Por qué? Esto yo en la cromatografía gaseosa, el, los, el flujo, la velocidad lineal, ¿verdad?, o las características de fuerza de la fase móvil, yo no las puedo cambiar demasiado, porque justamente, si ustedes lo vamos a ver, ¿verdad?, para lograr mejor separación, mejor resolución, cuando tengo muchos componentes, no puedo programar cambios en velocidad lineal de un gas como puedo cambiar, cambio o de flujo como sí puedo cambiar velocidad de flujo, ¿verdad?, en, en cromatografía líquida con todos los problemas que ya hemos mencionado a tener en cuenta con las fases móviles. Pero en gas no se puede. Entonces, lo que nosotros buscamos básicamente es que tengamos la menor altura del plato teórico posible, de tal manera de tener mayor número de platos teóricos por unidad de longitud y, por lo tanto, mayor eficiencia de la columna, al final, mejor separación, mejor resolución. Pero fíjense qué interesante. Si yo tomo el nitrógeno, ¿verdad?, cualquier variación que se produzca, no se olviden que el flujo están medidos, son gases, o sea, que están, este, sometidos a la temperatura de hornos, ¿verdad?, donde hay algún fenómeno de expansión, hay algunos pequeños cambios de velocidad lineal, en fin, cosas por el estilo, y la propia viscosidad característica de cada gas. Fíjense que el nitrógeno, por ejemplo, si yo muevo muy poquito el gas, el flujo de gas, se me producen cambios enormes en la altura equivalente a plato teórico. Se me mueve un poco para un costado, un poco para otro costado, y cambia enormemente. No ocurre tanto con el helio y ocurre mucho menos con el hidrógeno, ¿verdad? Por lo cual se recomienda usar helio. Y hoy día, eh, todos nos estamos pasando de nuevo a hidrógeno. Esto hicimos hace muchos años, luego, eh, digamos, por decirlo de alguna manera, criterios de seguridad mal entendidos, no, y algunas prácticas nuestras tampoco, no muy buenas, no llegamos a usarlo. Hoy estamos usando básicamente hidrógeno para altas resoluciones, alta eficiencia, que es lo que buscamos en sistemas de detección como masa y en cromatografía gaseosa, eh, con otro tipo de detectores como llama y demás, no es tan crítico y se puede usar hidrógeno. Aunque yo personalmente recomiendo trabajar con hidrógeno todo, sobre todo ahora que tenemos generadores de hidrógeno de menor costo, de mayor resistencia, de sistemas de hidrógeno.

Por lo tanto, la separación cromatográfica en general, ¿verdad?, se puede optimizar. ¿Por qué? Aumentando el número de platos teóricos en la columna cromatografía gaseosa, helio, hidrógeno. Aumentando la selectividad de la columna, es decir, seleccionando la fase estacionaria, ¿por qué? Porque la fase móvil no tiene rol de ningún tipo en interacción con los componentes. O aumentando los factores de capacidad para los componentes a ser separados. Y esto vamos a ver cómo se puede hacer, porque eso son características de la interacción del compuesto con la fase estacionaria, ¿verdad? Pero vamos a ver que hay formas de que eso puede también ser optimizado. Eh, para, para resumir todo esto, en cromatografía gaseosa, la fase móvil es un gas inerte: helio, hidrógeno, nitrógeno, por supuesto. La fase estacionaria es un líquido orgánico, orgánico polar o no polar o de polaridad intermedia entre un extremo y otro, que puede estar o bien recubriendo una partícula líquida, o sea, cuando las columnas son empacadas, o sea, tienen un relleno, tienen partículas que están recubiertas, ¿verdad?, de una fase estacionaria líquida. A ver, en cromatografía gaseosa, eh, de gas, análisis de gases, vamos a ver que también se puede utilizar, eh, directamente soportes, eh, como alúmina, sílica, en fin, que, eh, no tienen recubrimiento, pero son casos muy, muy particulares. En general, se utilizan columnas que tienen fase estacionaria, es decir, líquida, polares o no polares sobre o una partícula, o prácticamente ya en forma universal formando un film en la pared interna de un tubo capilar de fundida, que es, eh, que es vidrio, ¿verdad?, tratado de de forma que sea inerte.

En conclusión, para no, para tomar como premisa a encuadrar la cromatografía de gas, se utiliza para separar componentes volátiles o factibles de transformarse en volátiles. Si vos inyectas algo que es no volátil, lo que va a pasar es no nada, porque eso en última instancia, sino que va a haber, vamos a provocar problemas en los sistemas de inyección, en las cabezas de las columnas, la formación de picos fantasmas por degradación, unas cosas que luego vamos a ver más adelante. Por lo tanto, las etapas básicas involucradas en el análisis por cromatografía gaseosa tienen que ver con la preparación de muestra, la forma en detalle, luego la forma en que se introduce la mezcla y retienen, esto que lo vamos a ver, ¿verdad?, si es por sistemas de inyección por división de flujo, sin división de flujo, pulsado u otro tipo de formas. Y hay algunos más avanzados como inyectores de temperatura programada o, este, microfase y otras. Luego se produce, introduce la muestra, se va a producir la separación y la separación se puede hacer en cromatografía de una dimensión o de dos dimensiones, con además otras posibilidades. Y los sistemas de detección. Aquí tenemos algunos, ¿verdad?, de los sistemas de detección de cromatografía gaseosa que están registrados, son alrededor de 16, no todos se utilizan. Bueno, y aquí se ven los casos, digamos, más frecuentes. Una vez que esto sería el sistema cromatográfico, el sistema cromatográfico continúa con el análisis de los datos, ¿verdad?, que no es simplemente llenar fichas o tablas, como ya.

Por lo tanto, ¿qué es la cromatografía gaseosa? Método separativo para volátiles. Aquí lo que estamos viendo es un cromatógrafo típico con sus distintos componentes. No lo voy a repetir, solamente para incitarlos a ver el video que les dejé, porque realmente allí, este, han sido mucho más claros. Lo que yo voy a hacer, jamás.

En resumen, la cromatografía es una serie discontinua, es decir, se puede considerar, puede ser tomada como una serie discontinua de pasos de equilibrio que ocurren en la separación. ¿Qué quiere decir esto? Ustedes ya vieron lo que se produce. Se trata de un sistema físico estático. En el caso de la cromatografía gaseosa, fase móvil no se mueve, la fase estacionaria no se mueve y no interacciona con los componentes, y la fase móvil, que es un gas, ¿verdad?, este, o sea, no tiene interacción. Entonces, se van formando equilibrios. La teoría es un proceso estático y dinámico, es decir, que la fase móvil no se mueve, la fase estacionaria no se mueve, pero se van produciendo, aunque la fase no interacciona con los, los transporta. Por eso se llaman gases portadores, los transporta y eso hace que vayan interaccionando con esa fase estacionaria y de esa manera establecen un sistema de equilibrio que yo puedo modificar. O sea, no se van a formar, es un sistema de equilibrio porque en la interacción con la fase estacionaria no se forman enlaces covalentes, sino enlaces débiles, lo que todos conocemos. De tal manera que yo, a través de una, este, intervención externa, en este caso temperatura, ¿verdad?, hago que el equilibrio se vaya, llama, desfasando, de tal manera de que los compuestos, a medida que se van separando, pasen, sigan siendo transportados por la fase móvil.

Vamos a ver más en detalle. Ustedes lo vieron muy bien en cromatografía líquida, donde efectivamente la temperatura tiene un cierto rol, pero no tan importante, sino que más bien interesa la, podríamos decir, la entre, como forma la polaridad o características de la fase. Es decir, que en cromatografía líquida, cromatografía gaseosa, se va a formar, ¿verdad?, se puede establecer una constante de distribución de equilibrio específica de cada analito, que es la que yo voy a modificar por acción de los programas de temperatura, de tal manera de hacer que el proceso sea dinámico y lograr una separación entre los distintos compuestos. Es decir, que es lo que se explica abajo, ¿verdad?, y donde se, nuevamente, se aclara que la fase móvil es la que lo transporta de una parte a otra. Eh, nosotros en los tipos más utilizados son cromatografía gas-sólido, cromatografía gas-sólido, en el cual es lo que yo digo, es una columna rellenada con partículas, ¿verdad?, que interaccionan, este, donde el gas interacciona y es retenido. Tiene varias razones de ser, en particular, porque los volúmenes de gas son muy grandes para poder, este, cuando son mezclas complejas, ¿verdad?, y eso requiere mayor capacidad, y la capacidad está dada básicamente, ¿verdad?, en este caso, por la posibilidad de inyectar volúmenes mayores, que se da con cromatografía. Se hace también en cromatografía gas-líquido, que donde existe una fase estacionaria líquida orgánica, más o menos polar, sobre la partícula o mejor sobre el término.

Distribución, ¿verdad?, eh, lo que estamos hablando es cómo se distribuye un compuesto entre las fases. Se puede describir en general como la distribución de los analitos entre dos fases, independientemente del mecanismo de separación. Y específicamente se aplica a la cromatografía de partición, donde hay el compuesto se reparte entre dos fases, como es la cromatografía líquida, cromatografía gaseosa, ¿verdad?, eh, donde hay una distribución entre dos líquidos o entre un líquido y un gas. Así, okay, se puede la cromatografía de absorción se puede ver de esta manera, ¿verdad?, eh, mientras que se tengo la columna, tengo partículas, eh, o que interaccionan superficialmente o de partición, donde efectivamente hay un reparto con un determinado equilibrio entre dos fases, ¿verdad?, de distintas características. La fase móvil, la elución, eh, la, las características que tienen los gases, ¿verdad?, el sistema tiene que estar cerrado, ¿verdad? Bueno, cerrado, entendiendo que yo estoy trabajando dentro de una columna que es un tubo abierto, es decir, que la fase estacionaria está ubicada en un tubo que es la columna cromatográfica, que va a ser atravesada, ¿verdad?, por, eh, la a lo largo por la fase, como decía, tipo columna. Lo voy a repetir, ¿verdad?, empacadas, empaquetadas o capilares, que en este caso se refiere a diámetro fundamentalmente, ¿verdad?, y aquí están las características de cada caso. Aquí lo vemos en, digamos, gráfico. Esta es una columna empacada, partículas. Esta es una columna capilar, donde se ve en amarillo, ¿verdad?, lo que sería la sílica fundida, el vidrio tratado en la parte interna. Anaranjado se ve lo que sería la fase estacionaria líquida depositada sobre la pared. Y ahora vamos a ver cómo más adelante y externo. Esta capa marrón es, eh, un, en fin, de un polímero que se llama poliimida, que lo que hace es, como las columnas de vidrio capilares, que son de vidrio purificado de sílica fundidas, son muy, o sea, el agua les ataca con mucha facilidad, se vuelven quebradizas, son naturalmente también por abrasión con el oxígeno del aire, demás, lo que se hace es, son muy frágiles además, ¿verdad?, que esto se se coloca de esta manera. Fíjense los diámetros son diferentes. Ay, el diámetro tiene que ver cuando veamos con las columnas en que se se colocan, ¿verdad?, estas columnas tienen 30, 60 metros, eh, para evitar el daño mecánico, es decir, hay una fatiga mecánica que con un determinado diámetro. La fatiga mecánica se refiere a que y la columna está dentro de un horno que se está enfriando y calentando a temperaturas extremas, temperatura ambiente a 250, 350 grados, todo el tiempo, baja todo el tiempo, con lo cual hay un estrés mecánico que se evita y poniendo el tubo, ¿verdad?, en una circunferencia y la poliimida lo que le da flexibilidad, o sea, uno puede hacer un nudo. Tiene con la fase, las interacciones, ¿verdad?, son fase móvil, básicamente, y la retención está determinada por, en el caso de la, por la presión, o sea, que la presión de vapor de los compuestos, perdón, ahí quedó mal, de la presión de vapor de los compuestos y su volatilidad, es decir, el elemento clave, ¿verdad?, de, digamos, cómo los analitos se van a distribuir, dependen de su presión de vapor, su relativa de vapor, pero a su vez hay una, eh, interacción, ¿verdad?, con la fase estacionaria. Entonces, es decir, la conclusión, o sea, quiere decir esto es que la que ustedes vieron con fotografía líquida es válido, con la excepción del hecho de que la fase móvil no tiene interacción con los analitos, es decir, es un gas transportador, car, eh, o sea, mover los analitos a lo largo de la columna, eso es lo que hace la fase móvil. Y estos son de nuevo los, eh, gases que se utilizan: helio, argón, se puede utilizar también, esto se utiliza con algunos tipos de detectores, hidrógeno o nitrógeno. Y acá se ve lo que ya vimos para la curva de van Deemter, la relación entre la altura equivalente a plato teórico, es decir, aquello que nos determina una mayor o menor eficiencia de la columna, versus la velocidad lineal, que decimos que la podemos interpretar como el flujo de ese gas que utilizamos como fase móvil, y el comportamiento, ¿verdad?, que nos permite.

experimentalmente a nosotros tener la tranquilidad que variaciones de flujo verdad no nos produce una variación muy grande o no nos debe producir una producción muy grande de altura equivalente metálico. Es decir, no nos cambia mucho la eficiencia de la.

Fíjense que si yo tengo un manómetro que está mal calibrado, por ejemplo, trabajando con nitrógeno y yo empecé a trabajar en esta zona, en esta zona no se mueve hacia la derecha muy poco, poco cambio de flujo por minuto, por ejemplo, y la altura se duplicó, la eficiencia se redujo. Por lo tanto, la fase móvil o transportadora, car, no afecta la retención del sonito, pero sí puede afectar la eficiencia del sistema cromatográfico.

Sea, entes de difusión y eh, la suo molecular tiene que ver con la forma de en que son afectados por acción de la temperatura estos gases, otros que no se utilizan y eh, de modo de ver cómo difunden a través del tubo que la columna capilar, verdad, y cómo mantiene eh su, digamos, cómo se mantiene el flujo constante con las variaciones de temperatura.

También afecta la estabilidad de las fases tonales y analitos. Por ejemplo, cuando trabajamos con hidrógeno, obviamente puede reaccionar con los grupos funcionales de analitos y la fase estacionaria también o con la superficie del inyector, las conexiones y detector. Es decir, que hoy día se están adelantando todos los cromatógrafos de están adaptados para trabajar con cualquiera de estos gases, hidrógeno, pero no siempre ocurrió esto.

Y en el cambio de piezas o esto se debe tener en cuenta estos criterios. Saber el tipo de estacionarias no son afectadas, pero sí pueden ser afectadas cuando empiezan a por otros motivos, por ejemplo, uso extremo. Por ejemplo, para que tengan una idea, una capilar estándar puede estar diseñada para, digamos, utilizar en alrededor de 1000 inyecciones. Uno comúnmente hace más. Y además, este, eso está pensado para que el equipo esté trabajando todo el tiempo automático, además. Y eso no ocurre todo el tiempo. Por lo tanto, hay una serie de factores a tener en cuenta en el uso, verdad, eh, que pueden alterar este justamente esta, esta fases estacionarias y eventualmente a los analitos que pueden estar vinculados también con la fase, este, con la fase móvil.

Eh, aquí hay algo que, que, que también es importante. Uno de los grandes problemas que sea, sí, es un problema, es que muchos de estos gases eh pueden tener residuo. Por ejemplo, nosotros no usamos para de llama los detectores, usamos, por ejemplo, eh compresores, y los compresores pueden liberar algo. Hay que poner filtros porque liberan algo de agua o incluso de aceite, aceite. Y esto afecta el sistema de detección, por ejemplo.

Pero también somos generadores de nitrógeno, generadores de hidrógeno. Para que tengan una idea, nosotros estamos haciendo un reclamo al generador de hidrógeno porque tenemos una cantidad de agua residual en la generación que podemos medir en el caso del GC masa, detector de masa, por la presencia del fragmento 18 de agua en los en las calibraciones del equipo. La presencia de agua es algo bastante frecuente. Incluso nos ha pasado también con el. Hay que tener y tomar medidas. Las medidas son colocar filtros, verdad, en línea adecuada de filtros, verdad, y algún tipo de control que después vamos a dar para cada sistema.

Bueno, también depende, puede afectar la respuesta del detector la fase móvil. Por ejemplo, este, esto está tomado de uno de los grandes representantes donde se muestra las características de cada uno de los. El helio es muy caro, ahora es un gas estratégico, caro. El hidrógeno es fácil de generar, pero puede ser val explosivo. Los equipos tienen esa precaución. Pero además, eh, el volumen, la práctica en el sistema más salvaje que uno se pueda imaginar, el volumen de hidrógeno en un sistema cerrado, en un ambiente cerrado, que es necesario para que se produzca algún riesgo, es bastante elevado.

Y bueno, lo mismo con el nitrógeno que se mencionaba en las fases estacionarias en cromatografía gaseosa, un poco más en detalle lo que vivimos. Eh, fases estacionarias, verdad, es el principal factor que determina la selectividad y retención de analitos, o sea, en la forma en que interaccionan con los. Existen tres tipos de fases estacionarias en cromatografía gaseosa: sólidos, como vimos, adsorbentes, líquidos que recurren soportes sólidos, los sólidos adsorbentes y fácil. Hay otras, pero son variantes de esta. Por ejemplo, cromatografía gas-sólido, es decir, que yo lo que hago es analizar gases. El mismo material se puede utilizar tanto como fase estacionaria como material soporte. Y los adsorbentes incluyen los que vemos ahí: alúmina, tamices moleculares, sílica, carbono activado. Carbono activado se sigue utilizando mucho en las aplicaciones, verdad, este, de las que nosotros trabajamos. Y hay otros.

Alguna de compañeras tiene bastante en esta. Genera la ventaja de trabajar con esto es que evidentemente en las columnas largas se pueden, se pueden separar algunos compuestos que no se resuelven en otros métodos. Permite separar isómeros geométricos por, por ejemplo, con nitrato de plata. Esto es una columna, un uso. Dos, permite analizar gases. Desventajas: retiene polares de baja volatilidad, cambios catalíticos, este, es un catalizador, picos no simétricos, tiempo de retención muy variable, porque aquí está en cuenta el factor, verdad, de difusión que nosotros no consideramos en la teoría en la ecuación de.

Interresolución para este, para las columnas capilares. La cromatografía gas-líquido en capilar, bueno, en general puede estar con, como vimos antes, recubriendo un soporte sólido. Hay alrededor, generalmente sobre la interna, hay alrededor de 400 fases. Verdad, se utilizan muy pocas, pero hay disponibilidad muy grande. Son necesariamente muy semejantes, sí, y son todos polímeros. Pocos poliésteres son los más frecuentes. También flocados líquidos y líquidos iónicos en la nueva tendencia. Nosotros tenemos algunas columnas en el laboratorio. Y esta tecnología que tiene que mucho que ver la posibilidad de inyectar algunos líquidos complejos como el agua, no porque dañe las columnas, sino por las volúmenes de expansión que tiene, o sea, de volumen a volumen 1000 veces, o sea, son 1000 micras dentro de la columna. Eso es una inyección. Y las facilidad son aquellas que están ahí, se ven aquí, se ven algunas silano, siloxano con polimetil y etil, no etil fenil, verdad, y el pol es una polar, ser polar intermedia entre esto y toda una cantidad de cosas.

El hecho de que esté ligada a la, a la pared, a la columna, la parte interna, está pegada químicamente. En primer lugar, cuando yo empecé a trabajar, se disponía de fases líquidas que estaban soportadas físicamente, con lo cual con los aumentos de temperatura, de alguna manera la fase líquida, fase estacionaria, se arremangaba, iba avanzando sobre la columna. Ha podido ligarla químicamente, este, se pudo, verdad, mejorar dos cosas: primero, que eso no ocurriera, el arremangamiento no ocurriera. En segundo lugar, se puede trabajar con fases estacionarias líquidas de espesores mucho más pequeños, verdad, con lo cual aumenta la superficie de intercambio y por tanto aumenta la capacidad de intercambio de interacción y por lo tanto aumenta la eficiencia. Y también se impide el sangrado de la columna, es decir, se reduce. Porque de esa manera lo que se hace es este sangrado es cuando se liberan los monómeros, verdad, se libera monómero y aparecen como bases, una línea de base que está subiendo en el cromatograma. Se pueden ver los fragmentos cíclicos, etc.

Y el paso siguiente, verdad, bueno, aquí, bueno, aquí se ve un ejemplo de sangrado de siloxano, el tipo de reacciones que ocurren y, por ejemplo, en espectrometría de masa, una forma de ver el envejecimiento de las columnas es justamente ver cómo aparecen estos fragmentos que son polímeros que se van eh degradando formando este tipo de monómeros de reacción con distintos pesos moleculares y de alguna manera, eh, con, con fragmento. La detección de estos fragmentos determina condiciones de envejecimiento. Eh, normalmente eluyen de la columna como sangrado los siloxanos cíclicos y con una línea base ascendente y nunca como picos discretos. También se pueden ver picos cuando está muy dañado. En algunos casos se pueden ver. Y es, por ejemplo, una columna con sangrado, vemos como aparece este tipo de comportamiento en el cual las líneas de base comienzan a subir en el tiempo muy rápidamente. Esto es completamente complicado porque los picos están saliendo, verdad, la línea se cambia, o sea, que complica tanto la identificación, pero fundamentalmente la cuantificación.

Antes que me olvide, la, una de las cosas que, que se ha hecho últimamente es lo que se llama entrecruzamiento, decir que, como ustedes vieron en cromatografía líquida, la fase, verdad, eh, se produce una, los peines que mencionan siempre, también están unidos entre sí transversalmente, con lo cual de nuevo se aumenta, se puede reducir el film, verdad, por hacer fases estacionarias líquidas más homogéneas, mayor superficie, mejor eficiencia, pero también se reduce el daño.

Bueno, parámetros cromatografía gaseosa están dando aquí largo: columnas, columnas capilares, empacadas, por de fase, diámetros internos, espesor de film, temperatura. Fíjense que no se menciona para nada las características propias de la fase móvil en lo que tenga que ver con interacción, o sea, eh, no cambiamos la, los cambios de flujo no son demasiado importantes, como vimos. Eh, lo que sí nos cambia mucho es la temperatura en relación, verdad, a la modificación de ese equilibrio que ocurre con cada compuesto.

Bueno, esto es lo que yo pretendo que vean en el, en el video, distintas partes del equipo, eh, término general, en terminología general: fase móvil, transporta los solutos, se se llama carrier, portador, no interacciona con, con los analitos. Inyector, dispositivo para introducir muestras gaseosas o líquidas en la cabeza de la columna. Y este es el primer paso de complicación de la cromatografía gaseosa. Yo puedo inyectar muestras gaseosas, puedo inyectar muestras líquidas y también puedo inyectar muestras sólidas, que es un.

La columna se considera el corazón del sistema. Y ya vimos qué tipo de cosas pueden ser. Vamos a trabajar solamente con capilares, básicamente. El horno permite un incremento constante, isotermo o definido programado. La temperatura de la columna, es decir, a nosotros aquí no nos interesan las bombas mezcladoras que nos permiten cambiar el flujo o la composición de la mezcla que forma, conforma, verdad, la fase móvil en cromatografía líquida. No, aquí lo que nos importa es la programación de temperatura. El detector, ya sabemos qué es lo que hace. Y el sistema de procesamiento de datos, que básicamente está el secreto del desarrollo de los equipos, o uno de los secretos, verdad, en los últimos, yo diría, 10 años.

Los sistemas de regulación, o sea, las distintas etapas en tomar un sistema de regulación, una fuente de fase móvil, la gas carrier, la regulación se hace con manómetros, válvulas solenoides, ingreso de la muestra al inyector. Toda esta zona está termostatizada en forma diferencial. Una parte, vamos a ver que está en el inyector, que tiene una formación de temperatura o se fija la temperatura en forma diferencial. La columna tiene su programa de temperatura y lo mismo ocurre con la temperatura del detector. O sea, que esto, toda esta zona, en cualquier caso, está termostatizada, aunque las temperaturas o las distintas temperaturas sean diferentes.

Esto ustedes ya lo vieron, se refiere a, a los picos, verdad. El pico tiene que tener una serie de características, verdad, o sea, dice ancho de picos. Están los anchos de picos, están dados en la dimensión de retención en tiempo o unidad de volumen. Volvemos a lo mismo, fue desarrollado para cromatografía líquida, se aplica igualmente para cromatografía gaseosa. Estos son los factores que vamos a tener en cuenta. Y lo que se espera es un comportamiento de pico porque como ustedes ya vieron, en cromatografía gaseosa, quizás sea un poco más fácil de ver. Yo tengo una fase móvil inerte que transporta a los analitos y estos van a interaccionar con la fase móvil, cosa que yo puedo modificar, equilibrio que puedo modificar por acción de la temperatura. Por eso los programas de temperatura.

Ahora, la interacción del analito tiene que ser tal de que haya una determinada interacción hasta un cierto momento y luego el componente es liberado y sigue, verdad. Pero en el correr de la columna, yo lo que voy a tener es, puedo sacar una fotografía y los compuestos van a tener una determinada posición. Como todos avanzan, esa posición se va, va cambiando para, en la medida de lo posible, mejorar la resolución o separarlos más, de tal manera que en el tiempo el detector los registre a distintos tiempos, verdad. Pero lo que yo quiero es que el pico se haga simétrico, es decir, que la fase estacionaria interaccione adecuadamente y logre una buena resolución y pueda tener este tipo de forma de pico, que es muy fácil integrar automáticamente y también identificar automáticamente. Okay, así que esto es, eh, la idea normalizar los picos.

Aquí vemos como alguno de los problemas que ocurren, o sea, que este es el centro del problema de resolución. Fíjense que aquí agregamos algo más que es que la fase móvil es lo que primero que vamos a ver. Permite además limpiar la columna, o sea, esto ocurre en cromatografía líquida también, pero es fundamental en cromatografía gaseosa el hecho de que por no haber interacción con los analitos, yo tengo que asegurarme que todos los analitos salgan de la columna, verdad. Y esto tiene mucho que ver con el sistema de preparación de muestras.

El criterio de volatilidad que lo vamos a, ¿qué condiciones? ¿Qué características debe tener el carrier? Debe ser puro y seco. Ya vemos por qué. Si es impuro y húmedo, daña la columna, altera la respuesta de los detectores, perjudica la cuantificación de los analitos presentes en trazas. Por primero, porque yo no sé de dónde me va a salir un pico fantasma si yo tengo contaminantes en el gas, en la fase móvil. Si yo tengo agua, además, el problema que ocurre es que el agua va a tender a interaccionar con la fase estacionaria, depositándose, condensando, verdad, porque tiene una temperatura de condensación, verdad, relativamente elevada. Quiere decir que yo voy a poder tener al inicio de la columna, mientras sube la temperatura del horno, una cantidad de agua líquida importante que forma un film sobre la fase estacionaria, con lo cual esa zona está bloqueada o afectada en su interacción.

Las precauciones, bueno, tanques de gases, tamices moleculares, todo lo que yo les dije en cuanto tiene que ver con los filtros o el tratamiento del gas, como se ve acá, todos los elementos que se toman en cuenta. El control de la fase móvil, verdad, se puede hacer de esta manera, es decir, como hacemos nosotros, es midiendo con un rotámetro, verdad, y las opciones de flujo constante, presión constante, flujo programado, presión programada. Esto en realidad uno es consecuencia del otro, verdad, o están relacionados. Hoy día se puede lograr fácilmente con válvulas solenoides. Yo puedo regular desde el software de la computadora del equipo, verdad, todas estas condiciones.

Una forma de tener fase móvil, aquí le estamos haciendo propaganda a uno de los sistemas, hay muchas marcas, es generador de nitrógeno. Eh, fue funcionar directamente, verdad, este partir de un compresor de aire. Problema: los contaminantes se pueden eliminar directamente con filtros y absorbentes, no de modo que el nitrógeno permee selectivamente. Es decir, nosotros generamos nitrógeno a través de este sistema de filtración molecular. En el generador de hidrógeno, el hidrógeno se genera electrolíticamente a partir de agua desionizada, en realidad agua de calidad, lo que se llama mil-Q, verdad, es la unidad de electrolisis. Eh, es un electrolito sólido orgánico, verdad, este, por lo que no se necesita suministrar electrolito sobre el agua desionizada.

El esquema de procesos, verdad, entonces toda esta parte, análisis de matriz, métrica, todo lo que vimos para luego proceder a la separación. Es decir, lo que se trata de mostrar aquí es que tanto el sistema cromatográfico en sí, el instrumento, como vimos, es importante y debe ser seleccionado y utilizado adecuadamente, pero también todo lo previo tiene su. Más o menos lo que se muestra aquí, qué es lo que ocurre a lo largo de la columna para lograr un cromatograma resultante adecuado. Aquí vemos lo mismo.

Y para terminar, y les recomiendo si alguien le interesa, se lo puedo editar en forma individual, pero no lo puedo, se lo puedo dar, no lo puedo colgar, verdad, porque hemos hablado. Este es un lindo libro de práctica cromatográfica. Muy bien, vamos a interaccionar en las clases futuras y además vamos a interaccionar a través de. Muy bien.