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Buenas noches para todos y todas. En la clase de hoy vamos a hablar sobre la cámara de Neauar. La cámara de Nevuer es un grueso portaobjetos de vidrio en el que se le coloca un determinado volumen de muestra y que tiene como finalidad el recuento de distintos elementos en el microscopio. ¿Sí?
Algunos de los elementos que se pueden contar son leucocitos, eritrocitos, bacterias, levaduras, células epiteliales, esporas. Sí, recuento de leucocitos y eritrocitos en líquidos biológicos como líquido cefaloraquídeo. Actualmente esta es la principal utilidad, ¿sí?, para líquido cefaloraquídeo. También se puede hacer el análisis de orina minutada, ¿sí? el recuento de leucocitos y eritrocitos de orina y recuento de espermatozoides.
¿En qué situaciones vamos a utilizar la cámara de nevower? Bueno, puede ser cuando el recuento automatizado excede los límites de linealidad del equipo, ¿sí?, en pacientes que tienen recuentos de células muy elevados eh para hacer estudio citoquímico de líquidos biológicos en situaciones donde los equipos automatizados no estén disponibles, por ejemplo, porque estén rotos y en ese lugar no se cuenta con un equipo de backup, entonces ahí recurrimos a la cámara de nepower, ¿sí? O en lugares donde directamente no hay equipos automatizados. Sí. La realidad es que en nuestro país, en la gran mayoría de los laboratorios, hay equipos automatizados.
Bueno, ahora voy a hablar sobre las características de la cámara de Neower. Sí, la cámara de Neuware modificada, ¿sí? También se le llama así por el tipo de reticulado que que tiene. Como verán, tiene un tamaño aproximado de un portajetos. Sí, es un portaobujetos de vidrio grueso que tiene sobre su superficie tres prismas laterales. Sí, el prisma del medio está dividido por un surco transversal, ¿sí? Dividido en dos mitades iguales. Y en cada una de estas mitades se va a encontrar el retículo que nos va a servir para el recuento de leucocitos. ¿Sí? El prisma central a su vez se encuentra 0,1 mm por debajo con respecto a los prismas laterales. ¿Sí? Es decir, que estos prismas laterales se encuentra 01 mm por encima del prisma del medio. Estos prismas laterales sí sirven como superficie de apoyo para colocar el cubre. Sí, el cubre que se utiliza para la cámara de Nevuer es un cubre calibrado, es especialmente para la cámara de Nevuar. Sí, también se le dice cubrecámara calibrado. Ah, y se coloca sobre estos dos prismas laterales y allí se genera el espacio donde se va a colocar la muestra. La zona es de llenado, ¿sí? Corresponde con el área de la cuadrícula que está acá de 0,9 mm². Los campos interiores están esmerilados y pulidos. Acá tenemos una imagen, ¿sí?, eh, frontal donde se puede observar que los prismas laterales, ¿ven que son un poquito más elevados, generando este espacio y esta profundidad de 0,1 mm donde se coloca la muestra? ¿Sí? Esta es el prisma del medio y estos son los laterales.
Bien, esas fueron las características macroscópicas de la cámara de Nevuer y ahora les voy a explicar cómo son las características del reticulado, ¿sí? que lo vamos a observar al microscopio. El reticulado consta de un cuadrado de 3* 3 mm, como se observa aquí en esta imagen. Sí, 3 * 3, que está dividido en 9 cuadrados más pequeños de 1 por 1, ¿sí? 1 mm de lado por 1 mm de lado. Ah, lo que corresponde al número uno, el circulito número uno es este de aquí. Ah, que son cuatro los que tienen esta división. Ah, cada cuadrado de 1 mm por 1 mm a su vez está dividido en 16 cuadrados más pequeños de 0,25 mm cada uno. Sí, estos chiquitos de aquí miden 025 por 025 que están representados aquí con el número dos. Ah, estos cuadrantes de las esquinas son los que se utilizan para el recuento de leucocitos. Por otro lado, tenemos el cuadrante del medio que se observa acá, que va a medir uno por uno como los otros, pero que está dividido de una manera distinta, ¿sí? Va a estar dividido en eh cinco cuadrantes de 02 mm de lado. Sí, lo que está representado con el número tres. Y a su vez cada uno de esos cuadrados va a estar dividido en 16 cuadrados más pequeños. Sí, que miden 0,0025 mm de lado. Está este cuadrante central es para el recuento de eritrocitos y plaquetas. Ah, entonces la cámara viene acompañada de un cubre calibrado, como les comenté anteriormente, ¿sí? Que es fabricado especialmente para la cámara de Nevuer. Bien.
Y aquí les dejo otras imágenes de la cámara de Nevuer. Sí, acá podemos ver la cámara con los tres prismas paralelos. Sí, el prisma del medio se encuentra 01 mm por debajo con respecto a los otros dos y a su vez está dividido por esta ranura que observan aquí, este surco transversal que los divide en dosiprismas. ¿Sí? Y sobre cada uno de estos semiprismas se encuentra el reticulado que observamos al microscopio. ¿Sí? Sobre estos prismas laterales que están un poquito más altos se apoya el cubre calibrado y la y la muestra se llena por aquí, por este lado. Este es el reticulado que van a ver en el microscopio, ¿sí? que mide 3 * 3. Eh, los cuadrantes que quedan en las esquinas son los que se van a utilizar para el recuento de leucocitos y el del medio para eritrocitos, ¿no? En alguna bibliografía pueden encontrar que los cuadrantes de las esquinas los llaman como L y los del medio como E. Es una forma de llamarlos. O si no A, B, O C D. Sí, es lo mismo.
Bien, antes de comenzar con el procedimiento, es importante que verifiquen que tanto la cámara de nevower como el cubrecalibrado estén limpios. Ah, en el caso de no estar limpios, se limpia con alcohol, se deja secar y luego sí pasan a la técnica, hacer el procedimiento. ¿Qué tipo de muestra precisamos para esto? La misma que el hemograma, está sangre entera anticoagulada conta. debe tener los mismos criterios de rechazo que el tubo de para hemograma. Sí, no puede venir coagulada, tiene que estar correctamente enrasado y correctamente rotulado.
Bien, entonces la muestra no se coloca pura en la cámara, sino que hay que hacerle previamente una dilusión. Se le hace una dilusión 120, ¿sí? Con un diluyente que es el reactivo de turc o el líquido de turc. Sí. El líquido de Turc es una solución hipotónica que está compuesta por ácido acético glacial, que tiene como principal objetivo lisar los eritrocitos y las plaquetas. Y también contiene azul de metileno que va a tenir los núcleos de los leucocitos haciéndolos más visibles al microscopio. Sí, tanto el ácido acéticogla como el azul de metileno están disueltos en agua destilada. Entonces, lo que van a hacer es en un tubo de hemólisis preparan esta dilusión 120 y lo dejan reposar durante 3 minutos a temperatura ambiente. Sí, lo dejan sobre la mesada y de esta forma ustedes se van a asegurar de que eh haya una lisis completa de eritrocitos en estos 3 minutos. Ah, y van a ver que queda una solución clara. Pasados esos 3 minutos van a volver a homemizar y van a tomar con una pipeta, puede ser una pipeta paster o con una micropipeta, ¿sí? O un capilar. Van a tomar un poco de esa dilusión, una gotita de esa dilusión y van a cargar la cámara que se carga por capilaridad. ¿Por dónde la van a cargar? Por esta ranura que queda aquí. Sí, van a ver que queda un espacio entre el cubre calibrado y la cámara. ¿Sí? Entonces ahí apoyan la punta de la pipeta o la punta del capilar y van a ver que la cámara se va a llenar. Sí, es importante que eh no queden burbujas. Sí, si quedan burbujas en el llenado se debe realizar de vuelta. El ángulo recomendado entre la cámara y la pipeta es de 45 gr aproximadamente. ¿Sí?
Entonces, una vez que se colocó la muestra en la cámara, nos dirigimos al microscopio. Sí. Eh, lo que se hace es colocar la cámara sobre la platina en posición horizontal y a continuación lo que deben realizar es bajar el condensador del microscopio. Sí, bajarlo al máximo. Está de lo contrario no se va a poder observar ninguna célula. Si el condensador de la luz está alto, al ser una muestra clarita, no van a poder ver nada, está así que lo tienen que bajar. Una vez que bajaron el condensador de la luz, tienen que enfocar a 10 por primero para observar la distribución de las células y luego si pasan a 40 por para hacer el recuento.
Entonces, lo que se hace es, hay dos opciones, se pueden contar los cuatro cuadrantes de las esquinas. Sí. O se pueden contar los dos vértices opuestos, por ejemplo, A, B, O, C y D. Ah, las dos opciones son válidas. Ah, lo que sí tienen que tener en cuenta es un criterio que se utiliza a que todos contemos igual y es que las células que quedan por arriba de la línea superior y hacia la izquierda de la línea esta lateral se deben contar. Y las que no se cuentan son las que quedan de la línea de la derecha hacia aquí o hacia abajo, ¿está? Esas no las contamos. Es un criterio que se utiliza para contar eh todos de la misma manera. Ah, la diferencia entre los cuadrantes, entre los retículos, no debe superar el 10%. está. Eso habla de que, o sea, si el el porcentaje supera el 10%, habla de que las células están mal distribuidas, ah, que hubo algún error durante el procedimiento y hay que comenzar de vuelta. Ah, entonces lo que se hace es contar los leucocitos que van observando en cada cuadrante y hacer un promed. Un detalle es que el objetivo de la cámara neva para hematología, para el recuento de leucocitos, eh, es hacer el recuento total de leucocitos. No hacemos clasificación. Acá no diferenciamos qué tipo de leucocito, ni siquiera diferenciamos si son polimorfonucleares o mononucleares. Ah, si bien algunas veces van a observar que algunas sí se pueden diferenciar entre mononuclear y polimorfonuclear, pero no es el objetivo de esta técnica. Está como sí lo hacemos cuando hacemos magruen shina, que ahí sí la idea es distinguir qué tipo de leucocito observamos. Y acá les dejo una imagen de cómo se ven los leucocitos al microscopio en la cámara Neva Sí, como verán, no se parece nada a la coloración con Mayruan Shinsa. Sí, estos son los leucocitos, está es una muestra muy clarita, como verán. Sí. Y bueno, la idea es esa, hacer el recuento total de leucocitos. ¿Cómo van a diferenciar un leucocito de un artefacto? porque tienen una membrana celular y porque la luz atraviesa las células. Sí, se ven como brillantes. De esa forma ustedes van a poder ir identificando cuando lleguen al práctico. Lo van a ver mejor, pero por lo menos para que tengan una idea de cómo se ve en el microscopio.
Entonces, para hacer el cálculo del total de leucocitos, ¿sí? Podemos aplicar distintas fórmulas. Por un lado tenemos esta de aquí que es de las más utilizadas, que se aplica en las en los casos en el que usamos dos esquinas opuestas para hacer el recuento, ¿sí? Los dos cuadrantes opuestos que pueden ser A, B o C y D. Entonces, van a dividir el total de leucocitos que se que contaron sobre dos, ¿sí?, que son los dos cuadrantes por 10, que es por la profundidad de la cámara. para llevarlo a milímetros cúbicos, eh, por 20, que es el factor de dilusión. Ah, entonces este dos se va con este dos y les queda n. ¿Qué pasa en los casos de leucopenia? Sí, cuando el recuento de leucocitos es inferior a 4,000 es igual, solo que se prepara una dilusión uno en 10, no se hace uno en 20, sino que se hace una dilusión más chica. Entonces les va a quedar n sobre 2 * 10. Hasta acá todo igual. Sí, pero en vez de multiplicarlo por 20, lo van a multiplicar por 10 nuevamente, que va a ser el factor de dilusión. Esto les va a quedar n * 50. Ah, y acá les dejo un ejemplo de un caso en el que se cuentan los dos retículos. ¿Se acuerdan que la cámara tiene dos retículos? Está. Entonces, utilizando una evolución 1 20 se cuentan 23, 26, 22 y 21 leucocitos, lo que hace un total de 92 leucocitos. Y en el otro retículo se cuentan 28, 24, 22 y 26, lo que hace un total de 100 leucocitos totales. La diferencia entre los dos retículos es inferior al 20%, por lo que podemos aplicar la fórmula y hay un promedio de 96 células, ¿está? Entonces, lo que se hace es 96, que es el promedio, por 20, que es el factor de dilusión, sobre 4, que es el área contada, por 01, que es la profundidad de la cámara. Y eso les va a dar un total de 4800 leucocitos por microlitro, ¿ya está?
Entonces, con el resultado de estas fórmulas, lo que podemos obtener son tres opciones. O el paciente tiene leucopenia, es decir, el recuento de leucocitos eh inferior a un valor esperado, ¿sí? A un valor normal, leucocitosis cuando está aumentado el total de leucocitos o un recuento normal de leucocitos. Esas son las tres opciones que vamos a tener porque el objetivo de esta técnica es hacer el recuento total de leucocitos. Sí, recuerden eso.
Bien, y al igual que muchas técnicas manuales, existen errores. Sí. Eh, puede ser la limpieza de la cámara o del cubre, ¿sí? La calidad del líquido de turc que no tenga precipitado, que es muy común que tenga precipitado y eso se pueda confundir con algún leucocito o que el líquido esté vencido. Entonces, de esa forma no se colorean bien los núcleos de los leucos y a su vez no liza por completo los eritrocitos y plaquetas. que haya ocurrido un error en eh la dilusión, ¿sí? O un error de pipeteo de nuestra parte, eso puede pasar, que no se respete el tiempo de incubación, que hayan burbujas en el llenado, o que haya presencia de eritroblastos, los eritroblastos no se va a analizar, está porque tienen núcleo, entonces pueden llegar a confundirse con leucocitos. Ah, es importante que si hay un recuento de eritroblastto superior a 5% aplicar esta fórmula para hacer la corrección.
Bueno, y esto ha sido todo sobre cámara de Nevbauer. Muchas gracias por llegar hasta acá y quedo las órdenes para cualquier consulta.