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Bien. Hola. ¿Cómo están todos? Espero que muy bien. Eh, pido disculpas por la demora en subir esta clase. Bien, esta es la clase 13. Corresponde y la secuencia de trabajo en cromatografía corresponde al estudio de fases estacionarias por sus características, o sea, estamos hablando de la selectividad, eh, Y la interacción fase estacionaria-analitos. O sea, ¿qué criterios, si existen criterios o es solamente, eh, Peral, existen para la selección de una columna? Recordando que la fase estacionaria es uno de los elementos que uno compra. Ya aquí yo les muestro, aquí les muestro, verdad, eh, para que recordemos que la interacción entre la fase, eh, móvil y la fase estacionaria, verdad, es siempre un equilibrio que tiene una cinética. Que en el caso de cromatografía gaseosa, considerando que la fase móvil es, eh, un gas inerte, es un carrier, no hay interacción con el carrier, por lo tanto, la interacción se va a dar exclusivamente con la fase estacionaria. Y volviendo a insistir sobre el mismo punto, el equilibrio será desplazado entonces no por afinidad entre la fase móvil y la fase estacionaria, sino simplemente por la afinidad que los distintos analitos tengan la fase estacionaria. Y el desplazamiento del equilibrio se da básicamente por temperatura, es decir, la razón por la cual las, eh, se hacen mediante temperatura programada, donde la columna está.
Las modalidades de interacción entre la fase, entre una fase móvil y una fase estacionaria en cromatografía es como nosotros tenemos analitos de distintos tipos, verdad. La fase móvil es un gas, están en fase gaseosa. Vamos a tener distintos tipos de interacción. Puede ser aquella donde, como vimos en columnas empacadas, verdad, el soporte sin fase este estacionaria líquida colocada, verdad, interacciona directamente como si fuera sobre una partícula de sílica o de alúmina, que son también del tipo de interacciones que el que se maneja. Por eso se habla de adsorción. Mientras que todo lo que vemos, todo lo que vamos a ver de aquí en adelante, se refiere a una relación de los analitos, verdad, con una fase líquida que puede estar sobre un, eh, sobre un soporte sólido o directamente sobre la columna. Y hablamos de cromatografía gas-líquido. De acuerdo, gas es el carrier, portador, fase móvil. Líquido en la fase estacionaria, normalmente soportada sobre la pared de la columna, químicamente ahora ligada, ligada o directamente ligada o soportada. En este caso, no ligada, soportada solo una partícula que prácticamente no vamos a ver ningún caso. Y este tipo de cromatografía gas-líquida es la que se conoce como por el fenómeno de partición, o sea, partición entre la fase móvil, el gas que transporta los analitos volátiles y la fase líquida que está sobre, ver, en este caso, ligada a las columnas.
Las columnas de cromatografía gaseosa han evolucionado, verdad, hasta llegar a lo que estamos utilizando hoy, que no, no tiene por ser el punto final, ni seguramente lo va a hacer. Yo, por la, por digamos, por mi trayectoria de edad, eh, no diría que acompañé todo esto, pero me tocó ver una buena parte del desarrollo de lo que fueron, eh, las columnas capilares, verdad. Entonces, en principio, lugar, como trabajamos con columnas de este tipo, rellenas de vidrio, de metal, explíquenme, en el cual se trataba con este, con un soporte inerte y poroso, verdad, que tenía una fase estacionaria líquida soportada, como yo les comenté, estrictamente colocando la fase sobre las partículas con un solvente apropiado para la fase estacionaria y colocando rotavapor. Y como hallamos una distribución más o menos, no había reacción química entre la fase, eh, el soporte, perdón, y la fase estacionaria. Luego se empacaron con, se trabajó mucho con carbonato, fue un éxito y todavía hay aplicaciones importantes. Luego vinieron las columnas capilares de vidrio. Son, acá nosotros tenemos un equipo ahora totalmente en desuso, básicamente, por decir, nuestra de fabricación de capilares, que luego este colocamos la fase líquida dentro, verdad, también como les mencionaba hoy, a través de la fase, este, estacionaria líquida adecuada y pasándolo por la, quedaba soportado también físicamente, lo cual significaba, como mencionaba, temperatura, se producían temprano, verdad, que la fase se corría también por acción de la condensación del solvente de las cabezas de las columnas, significaba que la fase estacionaria comenzaba a moverse entre la columna, remangarse entre la columna. Y por otra parte, manejar estas columnas era una práctica, verdad, de este, ¿cómo se llama?, de no amarse loco, lo que es loco, porque se rompía cada hasta llegar a las columnas capilares actuales. Ya lo vimos, verdad, las columnas son de las que son de este, ¿cómo se llama?, las las comunes, las capilares tienen estas características. Ya le hablamos que los 100 metros normalmente no se utilizan, se utilizan 25, 30 metros, hasta 60 metros para que tenga una, solamente una comparación. Esto de milímetros y metros. Las empacadas que yo utilizaba hace mucho tiempo eran de 2, 4 metros de largo, perdón, de 2, 3 metros de largo y el diámetro interno de 2 a 4 mm. Y luego hay preparativos también, verdad, con otro tipo de, ¿cómo se llama?, los 4 mm de diámetro interno, no son cm, 4, lo que vemos acá. Ya lo habíamos visto, lo habíamos interno recubierto por una poliamida y la fase estacionaria por dentro. Aquí esto se encuentra, se llama, en mayor escala y de nuevo vemos la el tubo de sílica fundida, la fase estacionaria dentro y la protección externa de poliamida con algunas medidas prot.
¿Cuáles son las ventajas de sílica fundida? Menos de una parte por millón de óxidos metálicos, compuestas más del 5%, o sea, que obviamente es mucho más inerte que el esto es importante porque nosotros no solamente vamos a ligar una fase estacionaria, verdad, sino que, eh, cualquier que puede ser su presencia, metales pueden producir transformaciones. [Música] Es un grosor, sino que además, este, se llama, le hace mucho menos, ¿cómo se llama?, mucho menos frágil que el frágil, no es la palabra, flexible de paredes, mucho más derivadas, lo cual significa, entre otras cosas, justamente que se vuelven sin problema, flexible, instalaciones simples. La sílica fundida desnuda sí tiene la poliamida muy frágil y porque yo les decía, significa que tanto el oxígeno, el aire como el agua lo puede atacar y se produce, por eso, entre otras cosas. Bueno, las fases estacionarias, ya lo hablamos, de nuevo me van a oír, de nuevo, recuerden la forma de trabajar en cromatografía es fase estacionaria, por lo tanto, la fase estacionaria es el principal factor que tiene que ver con la selectividad y en consecuencia con la retención de los analitos. Ahí se ve simplemente como vemos en la inyección, esto, esto es inyección directa, aquí hay un liner, pero básicamente lo que interesa es que se va a producir a la cabeza de la columna una banda, banda muy estrecha, verdad, cuanto más estrecha, mejor. Lo vimos para el fenómeno de resolución, considerando los dos factores importantes: uno que compramos, que es la fase estacionaria, su selectividad, y el otro que es operativo, que es la forma en que nosotros, a través del programa de temperatura, vamos a analizar, vamos a desplazar el equilibrio. Esto está todo resumido aquí, verdad, que tiene que ver con el equilibrio. Lo importante es para recordar siempre es que estos equilibrios se establecen no en base, finalmente, concentración, la cantidad de moléculas de un tipo de analito u otro que se encuentra en un determinado momento, en un determinado periodo de tiempo, dentro de la fase estacionaria y dentro.
Bueno, aquí se desplazan. Yo creo que esta imagen está muy buena. Si vemos, o sea, vemos interacciones de los distintos componentes y eso hace que avancen en la columna. Esto es así para poder entenderlo cómo funciona. Ustedes imaginen una fotografía de un determinado, o sea, la forma, la dinámica de la columna es lo que nosotros vemos reflejado y en el registro correspondiente del gráfico que llamamos, verdad, corriente iónica total. Cuando hablemos, lo importante a tener en cuenta en toda esta historia es el hecho de que aquí lo que estamos haciendo es trabajar sobre una fotografía en la cual vemos que ese equilibrio en cada momento, cómo se va produciendo el desplazamiento, yendo cada analito avance y avance en forma diferencial en función, en principio, de su selectividad y en buena medida también de su volatilidad.
¿Cómo? ¿Cuáles son las bases de la interacción con la fase estacionaria? ¿Cuál es la base de selectividad, verdad, que nosotros estamos manejando? Básicamente, tenemos que tener en cuenta que la separación es una medida del equilibrio. Otras intermoleculares son iónicas, en el caso de cromatografía de intercambio, enlaces de hidrógeno, que es lo que nos va a interesar también, que son las interacciones, eh, fuerzas, también, verdad. El equilibrio afectado por presión, o sea, por el flujo de alguna manera de la columna, las limitaciones que nosotros sabemos que existen tanto en cromatografía líquida como en gaseosa, y también de la temperatura son los factores que que afectan el equilibrio. Y obviamente, el equilibrio es una situación temporal, cuenta ese factor. Por eso yo hablo siempre de mirar la fotografía, verdad, y no, y no la, o sea, mirar la fotografía, cambiar el volumen, porque creo que esta estaba muy bajo. ¿Cómo se llama? Un segundo, por favor. Ahí está. Cambiarla. El factor de equilibrio está relacionado, entonces, por eso hablar de la fotografía en un determinado tiempo para entender el proceso. El proceso tiene una dinámica de absorción o, digamos, para entenderlo mejor, de partición entre una fase y otra fase.
¿Por qué para cromatografía gaseosa estos procesos son más importantes? Para la fase, este, porque la mezcla de componentes es tan fácil en fase gaseosa, por lo tanto, existe un, un desequilibrio natural, verdad, en la forma en que los analitos se van a mover, transportados por la fase móvil. O sea, que la principal limitante del método cromatográfico, cromatografía gaseosa, es el hecho de que todos los componentes de la mezcla a ser analizada deben ser capaces de pasar a fase gaseosa y ser termorresistentes, o sea, no modificarse, alterarse, verdad, a esa temperatura por un cierto periodo de tiempo, que es aquel que atraviesa la columna. Esto no se compra. Cuando uno compra una columna, una fase estacionaria, nunca nos van a decir nada acerca de los analitos. Ese es nuestro problema. Ellos nos van a hablar de las temperaturas de soporte, de tolerancia de las columnas, vamos a hablar de distintas temperaturas máximas, temperaturas mínimas, pero nunca nos olvidan hablar de la eficiencia térmica, verdad, en cuanto a que los analitos que se puedan utilizar o no se puedan utilizar. Ahora, ejemplos y aplicación, pero nada más. O sea, que de nuevo, sobre todo en cromatografía gaseosa, es importante comprender la, digamos, las los factores, las variables que están involucradas, porque de esa manera es como uno puede diseñar su propio método, porque no hay otra forma, o a menos que alguien lo haya hecho antes, que bueno. Esto es simplemente repetido, solamente que gráficamente nosotros nos vamos a parar en la parte capilares otra vez para tener una idea un poco más del detalle.
Los parámetros para columnas empacadas, co, open tube, o sea, tubos abiertos, verdad, este, doble está recubierto en la fase en la pared, de vuelta los 5 metros, los espesores de film, hablamos los flujos. Fíjense que las columnas empacadas se puede trabajar con flujos muy altos, cosa que no ocurre en las columnas capilares. Y esto ya lo explicamos, que es la famosa historia de las mangueras y el agua, es para mantener una determinada chorro, flujo afuera cuando estoy regando, yo necesito una presión de ingreso de acuerdo a largo y a lo largo de la la columna, en este caso la manguera, y también el diámetro. Bueno, las capacidades. Fíjense que se puede trabajar hasta 10 microgramos en separación en columnas empacadas. No te habla de la resolución, dice cuál es la capacidad de esa fase estacionaria en esas condiciones. Y fíjense cuánto es en columna capilar. ¿Qué quiere decir que a capilares yo tengo que también tener otro factor en cuenta, que es la capacidad de esa columna de modo de no saturar toda la. Y luego el número de platos teóricos, la altura equivalente, mejor dicho. Fíjense la diferencia, es realmente importante y el número de platos teóricos en consecuencia cambia y eso determina que la resolución sea muy buena en un caso y bastante mediocre en otro. Esto es cuando uno puede elegir. O sea, que hoy día, si se puede elegir, elijan capilares.
Bueno, simplemente como como cultura general, el proceso de construcción de columnas capilares es simplemente esa, esos tubos, verdad, que fueron con sílica fundida de alta pureza. Aquí vemos la estructura de una, una sílica fundida, grosores, verdad, es estirada a un diámetro por control, se estira automáticamente y tener el diámetro interno deseado. Luego se produce el recubrimiento de la poliamida y finalmente se hace el enrollamiento, que ya vimos que tiene una consecuencia. No es cualquier diámetro de columna, digamos, columna enrollada, sino que depende mucho de, eh, la resistencia mecánica, sobre todo. Hablamos al inicio que esto se las columnas están dentro de un horno que calienta y enfría permanentemente, con lo cual, eh, hay un estrés mecánico bastante importante a consecuencia de de temperatura y por eso los diámetros de esos enrollamientos no son cualquiera.
Aquí se ve los distintos tipos de grupos señalados en la superficie de la sílica fundida, o sea, los cationes en la sílica se pueden encontrar como cationes simples, se encuentran formando hidrógenos en puentes, como grupos terminales. Y esto es lo que nosotros tenemos que tener en cuenta para hacer que la fase estacionaria se ligue químicamente. Okay, lo vamos a ver acá. Es un proceso que tiene que ver también con este fotorreactivas, por ejemplo, metil siloxanos, eh, donde en este caso es metil silano. Acá tenemos, eh, posibilidades de tener, por ejemplo, fenilo, verdad, eh, donde puedo tener 95% de, eh, fenilo, 5% de metilo, verdad, y, eh, hay otra fase, eh, fadas, eh, de más. Y la formación de las fases ligadas, verdad, tiene que ver con este proceso, verdad, por acá se ven las las grupos silil metilo, verdad, y se va a producir ese tipo de polimerización en la pared de la sílica. Y lo mismo ocurre con los polietilenglicoles en las fases polares. Una característica importante que tienen este este tipo de anclaje químico es su estabilidad. Entonces se muestra cómo se hace de alguna manera el tratamiento para lograr las fases estacionarias. Aquí está la superficie interna, la superficie interna se silica y este se ve como se evoluciona, o sea, la regulación de grupo terminal que puede ser silil oxilo con grupos modificados con estanoles, con los silanos, perdón, de la pared, la pared interna que se producen la flex para formar la fase estacionaria. También hay, aunque nosotros no lo vamos a ver en detalle, algunos, este, fases estacionarias como las ciclodextrinas, beta y gamma, alfa, beta y gamma, en realidad ciclodextrinas. Las ciclodextrinas tienen un interés particular porque estos túneles que dejan, o sea, si se imagina esta la fase estacionaria, verdad, esto en realidad unido a la sílica forma especie de, se llaman, verdad, donde queda una parte interna más hidrofóbica y una parte interna externa, perdón, hidrofílica. Y esto está unido a la columna, verdad, a la sílica de la columna. Esto determina que la separación aquí se haga básicamente por el fenómeno de inclusión dentro de esos toroides de los compuestos. Fíjense que eso ya no es una situación, eh, como se llama, de de interacción directa con la fase, sino que depende mucho de la estructura, de la geometría y de la conformación espacial de los compuestos. Quiere decir que estas fases se utilizan fundamentalmente para separación de isómeros, enantiómeros. Okay, aquí se muestra, verdad, eh, las la unión a a las paredes. En realidad, estas fases son se utilizan como un esqueleto, es decir, la ciclodextrina se coloca la, de alguna manera, digamos, incluida, suelta, mezclada, suelta, mezclada con un polietilenglicol porque no se liga bien a las paredes. Entonces, en realidad, tenemos una base de polietilenglicol por debajo, verdad, y, eh, ¿cómo se llama?, por encima normalmente metil siloxano y por por fuera tenemos ligada la ciclodextrina. El ligamiento de la ciclodextrina no es químico, sino que está regulado también por enlaces débiles, con lo cual estas columnas tienen, eh, límites de temperatura muy bajos, verdad, aunque ahora se han ido mejorando bastante más por el hecho de que justamente, eh, se pueden separar las fases. Aquí lo que se muestra es la forma en que, en este caso, el mentol de estrógeno, que tiene esta conformación espacial, va a interaccionar, mientras que el levógiro tiene otra conformación. Aquí tenemos que ver los dos, los tres ejes interaccionar de manera distinta, de manera pod. Lo mismo con los exociclohexanos, perdón, que van a tener distinta conformación espacial.
De acuerdo, últimamente cada vez más se encuentran en aplicación los líquidos iónicos. Acá vemos algunos ejemplos que son de los principales y, digamos, que es una tecnología que totalmente no está totalmente dominada. Si bien, este, en este tema, un campo enorme que se abre y tiene como razón fundamental dos cosas: en primer lugar, el hecho de que estos estos polímeros de líquidos iónicos sustituyen con ventaja, con mucha ventaja, a las fases polares, básicamente, polar básicamente. Y por otro lado, no menor, verdad, se puede trabajar directamente con muestras que tienen alcohol, agua, con grandes expansiones, verdad, eh, y sin que se produzcan muchos daños en la columna. Entonces, lo de la expansión se llega, no para que tenga el flashback, una, no tenga problemas en cuando se condensa el agua, porque digamos, eh, transforma el agua en un solvente como es interesante. No vi caso, pero sepan que existen para fases polares. Diría que es la tendencia en este momento. Sepan que es importante que, por ejemplo, para, de acuerdo al tipo de analito que uno quiera analizar, verdad, hay también es el agua, limón, procesamiento, problemas de congéneres, o sea, estructuras relacionadas entre sí, y otro tipo de aplicaciones. Es decir, las explicaciones específicas con columnas, con fase iónica, con diferente polaridad, verdad, nos muestra, verdad, cómo hay una mayor especificidad, sobre todo hacia los compuestos que podrían tener polaridades muy similares. Y los límites de temperaturas son como están acá, mientras que en Carbowax el tope es 250 grados y, eh, no se puede subir mucho más que eso. Ya que los líquidos iónicos, en definitiva, tienen una flexibilidad de uso mayor. Para uso, verdad, nosotros podemos trabajar sobre esta escala. Recuerden, la polaridad no es una escala arbitraria. Si el problema que se mide con distintos tipos de, como diríamos, de variables, verdad, quién trabaja con, ¿cómo se llama?, potencial iónico, con otro tipo de cosas. Bueno, aquí la polaridad se va, la vamos a definir en función, en forma relativa, verdad, en términos de una escala arbitraria que vamos a definir luego, pero basta que vean que hay columnas, por ejemplo, 100% de metil polisiloxano, polares, no polares, de polaridad intermedia, con un 5% de fenilo, aumenta la polaridad, 5%, luego aparecen las siloxanos, las polietilenglicoles y luego aparecen otras. Y luego tener el tema del, o sea, que hay una gama en la cual uno puede trabajar. Esto se compra, es decir, como dijo la, repetimos aquí, metil siloxano, fenil siloxanos, ciano propilos, eh, y polietilenglicoles polares. Estas son polaridades polares. La, aquí en, y las especiales, como es el caso de las ciclodextrinas, las de líquidos iónicos entrarían en esta zona más abajo, verdad, en algunos casos no son especiales, sino que se están introduciendo como fases de uso genérico. Recuerden, las especiales son como estas, conformación, es decir, por conformación estructural espacial diferente. Habíamos hablado de los rangos de temperatura. Fíjense que aquí se muestran las diferentes rangos de temperatura. Si hay un rango inferior y un rango superior. El rango inferior se refiere fundamentalmente a cuando las fases, verdad, se llegan a, ¿cómo se llama?, cristalizar. Okay, por debajo de también la temperatura, muy bajas, se cristalizan. Hay aplicaciones que trabajan con sistemas de, hornos al revés, o sea, de crío, sistemas de enfriamiento que permiten trabajar a temperaturas muy bajas con sistemas de inyección y detección también.
Bien, entonces, eh, tenemos que tomar el inferior y hay una temperatura superior por encima de la cual la fase también sufre, en este caso, no cristalización, pero se empiezan a despolimerizar, una despolimerización importante. Esto es lo que se muestra aquí, antes que me olvide, porque yo no me acuerdo si más adelante lo mencionamos. Las fases estacionarias están dos temperaturas máximas. Tienen una temperatura máxima a la cual puede llegarse con un programa de temperatura y estar infinitamente ahí, o sea, que es estable a esa temperatura por un cierto periodo de tiempo largo sin problema. Y hay otra temperatura máxima, que es a la que puede llegar y puede estar simplemente minutos, segundos, y como tiene que empezar a bajar la temperatura, por si no, después esas dos temperaturas máximas hay que tenerlas en cuenta cuando se establece un programa. Nosotros tenemos una tendencia al hacer los programas de temperatura, que es que al final dejamos 5, 10, 15, 20 minutos, depende del contenido de la muestra, a una temperatura máxima como isoterma, después de hacer el programa para purgar de alguna manera lo que queda y lo ponemos a una temperatura máxima de estabilidad. No hay ningún problema, pero si lo ponemos a la temperatura máxima que soporta la columna, la vamos a degradar. El día útil va a bajar sustancialmente. O sea, que hay que tener en cuenta los dos. Obviamente, la temperatura máxima de trabajo, que es la primera, que puede estar mucho tiempo, es la que nos interesa a nosotros en los programas. Sabemos que es bueno saber el rango hacia arriba porque nos puede dar alguna ayuda en algún momento y no debemos pasar lo que ocurre cuando se sobrepasan las temperaturas, verdad, de columnas capilares, va a ocurrir lo que se llama el sangrado, verdad, es decir, el blanco va a perder fase y pierde por despolimerización.
Entonces, aquí tenemos el, un rango, una, un comportamiento, no importa si es isotermo o programado, en este caso un programado, en la cual vemos que cuál es un comportamiento en A de una fase normal, o sea, hay una pequeña deriva. Normalmente, si ustedes quieren jugar con esto, yo les digo, cuándo llega a la meseta, es porque se completó el programa de temperatura, está llegando a isoterma, está en isoterma. La una está dañada. Fíjense que hay a partir de determinado tiempo, no temperatura, de tiempo, hay un aumento muy importante, verdad, de la línea de base como consecuencia de ese sangrado. Si se ven algunos picos, pero básicamente es una corriente permanente de iones que está pasando, ya sea en un FID detector o en el máster, que está pasando en ese momento, verdad. La columna puede estar dañada por encima de la tolerancia estacionaria, se han hecho muchas inyecciones, o sea, está envejecida y estuvo almacenada con los extremos abiertos, es decir, cuando sacamos, por ejemplo, ahora que estamos en las famosas cuarentenas, el problema que estamos teniendo es que yo, particularmente, me olvidé porque no pensé que iba a durar tanto, sacar las columnas de los equipos, con lo cual toda la humedad ambiente y todo el oxígeno está entrando. ¿Ves? Decir, bueno, pero cuando la apagas también ocurre. Sí, pero yo si trabajo durante todo el tiempo a lo máximo que pueden estar apagados los equipos, puede ser que 4 días y inmediatamente al prenderlo se elimina con el móvil y con la temperatura el agua todo que dentro. En estos casos no. Y eso lo daña bastante. Es una importante. ¿Cómo se cierran los extremos? Se cierran con tapones de goma, la pincha con el extremo de la columna y queda cerrado.
Entonces, las fuerzas intermoleculares que que digamos que relacionan básicamente el equilibrio, ese que vimos, la fase dentro de la fase estacionaria con los analitos, son las fuerzas de puente, eh, o sea, estas fuerzas están presentes. La dispersión están presentes siempre, este, pero la dispersión no es de mucho interés en sí cuando los analitos, eh, cuando los hidrocarburos no polares son los analitos. Entonces ahí tenemos un problema que no hay un vínculo directo y por lo tanto son cercanos y por lo tanto tenemos que trabajar de otra manera, básicamente como temperatura. Okay. Entonces, la clasificación de fuerzas pueden ser por dispersión, dipolo, por inducción, inducido, orientación, dipolo-dipolo, inducido, siempre en hidrógeno. Estas condiciones será la interacción más fuerte y este, eso es lo que nosotros vamos a jugar cuando definamos la selectividad de columna, fase y nosotros tenemos idea de qué tipo de analitos vamos a analizar. Si te paras frente a un equipo sin saber qué tipo de muestra estás analizando o vas a analizar, ni saber, es muy difícil hacer algo y habrá que trabajar un rato para tratar de definir lo que está la información de las casas, equipos y de las viales de interacción. La fase estacionaria, la interacción por dispersión está relacionada con la atracción intramolecular del compuesto y la que tan polarizable puesto con un papel importante, obviamente, las moléculas más grandes son más polarizables que las pequeñas. Función similar justamente por posibilidad de interacción. Recuerden que el paradigma, entonces, este, la fuerza, grupo funcional o fase puede ser metilo, como siloxano, también ha mezclada, pero hablamos de esta manera. Y las fuerzas de interacción por disposición, en el caso de metilo son fuertes, con fenilo son muy fuertes, y estos tres son fuertes también. Entonces, tenemos la primera. Cuando tenemos compuestos de tipo fenilo, aromático, vamos a tener interacciones de dispersión muy fuertes, por lo tanto, tenéis lo que tenés. Si si tenemos un metano, polisiloxano, evidentemente la no corre y las otras o corren menos, perdón, y en las otras del mismo. Las interacciones por dipolo, verdad, es fase estacionaria y compuestos con momentos bipolares. Lo que lo que aquí se ve, por ejemplo, los pocos con copilo y las de dipolo tienen interacciones ente fuertes, o sea, imaginen la superficialidad de esa estacionaria, por lo tanto, cómo se llama, es un factor muy importante a la selección de esta fase. Si tengo un analito que no tiene [Música] momento alcohólico, la interacción del dipolo no tiene influencia. Alcohólico, de nuevo, lo tomo como ejemplo. Si un compuesto tiene, pero la fase estacionaria de dipolo, no se produce dipolo. O sea, elijo la fase estacionaria en función del analito o tengo los analitos y uso. Y ahí de nuevo, la gallina o el huevo. O sea, o tengo por definición los analitos que sé cuáles son, tengo que analizar y tanto correspondiente para tener las mejores interacciones, o eh, elijo la fase estacionaria, verdad, y me restringo a que podré tener determinado tipo de resultado de acuerdo al analito que estoy analizando. Entonces, esto la gallina, la solución salomónica es que casi todos los laboratorios, verdad, que trabajan, no en análisis permanente rutina, tipo análisis, no, que varían, tienen claramente columnas apolares y columnas polares, de tal manera de tener un extremo. Eh, por trabajamos con, eh, 5% fenil, 95% metil polisiloxano y con Carbowax, y de esa manera cubrimos lo que nos interesa. Mayormente hemos tenido que adquirir fases. Bueno, también las quirales, las tenemos, están operativas. Eh, hemos tenido que adquirir algunas fases especiales, verdad, para aplicaciones especiales. Por ejemplo, en el caso de los análisis de ácidos grasos, hay un grupo entero de facultad que trabaja en esto. Las columnas tienen que ser polares, trabajan con derivados de, tienen que ser polares y se llama FFAP, Free Fatty Acid Phase, o sea, que son columnas especialmente diseñadas para trabajar con este tipo de compuestos, como son los ácidos grasos.
En la interacción por puentes de hidrógeno, que es la que nos resulta más cercana, relacionar con la capacidad de la fase y el analito para formar enlaces de hidrógeno, no es importante cuál es el sector de protones o donante, siempre que se produzca interacción. O sea, en los enlaces de hidrógeno es importante que exista la posibilidad de interacción. Obviamente, con metilo no hay, con fenilo es relativamente débil, pero es muy interesante porque el fenilo es una estructura plana, entonces hay una superficie interesante de interacción, verdad, que puede ser bastante. La interacción hidrógeno moderada en trietilenglicol es débil y en polietilenglicol, con líquido iónico es, y luego, obviamente, tenemos los sistemas múltiples. Entonces, esto es una sistemas múltiples, que es la vida real, verdad, o sea, uno puede tener una grilla de este tipo, suponiendo que tienes un bolsillo amplio para colocar la fase estacionaria sin restricciones y voy a decir, bueno, a ver, tengo estas estas cajas, seis cajas con seis distintas columnas con seis distintas fases estacionarias, puedo elegir de acuerdo a la mezcla de analitos que tenga, verdad, cuál de ellas, qué tipo de interacción voy a, como se dice, a hacer predominar o voy a aprovechar más y por lo tanto es la que voy a colocar. De lo contrario, teniendo nosotros, como saben, tenemos una metil fenil y una polar, con lo cual trabajamos dentro de este esquema y funcionamos bastante.
Bueno, aquí se muestra en forma práctica, verdad, utilizando una serie de compuestos, podemos ver que esto no es este accidental la elección de estos compuestos, pero bueno, en un caso de un polietilenglicol, nosotros tenemos una mezcla de 27 compuestos. Fíjense que salen los 27 y fíjense el orden en que sale, o sea, que hay una fuerte, eh, ¿cómo se llama?, retención de estos compuestos. Podemos ver cuál es el cuatro. Cuatro es un nonano, verdad. Bueno, ¿dónde está la interacción? Si esto no tiene capacidad por hidrógeno, pero es muy volátil, o sea, que va a salir siempre rápidamente, verdad, de las columnas. Tenemos el seis, que es el hexano, el seis también, pero entre el cuatro y el seis hay, entre cuatro el nonano y seis el hexano, hexano, CH2, lo tanto son de diferente, fíjense la diferencia de puntos de ebullición, verdad, que tomamos como una medida de la volatilidad de la presión de vapor y por lo tanto explica el orden de elución. Cinco y 18, cinco tolueno y 18 propanal. Son muy similares, sin embargo, las temperaturas, eh, ¿cómo se llama?, son un poco diferentes, pero se separan muy bien. Y ahí tenemos que ver, perdón, no se separan en absoluto, perdón, lo cual explica justamente. Aquí tengo una funcionalidad también que es el núcleo aromático, o sea, que esto no se logra. Y así sucesivamente. El último que sale es el 17, es el más retenido, debería ser el más polar. El 17 es el naftaleno, el naftaleno es un núcleo que es plano, verdad, y tiene una buena interacción, pero además tiene un punto de ebullición que es el más alto de todos, verdad, entonces más que el dos, decano, que es el 11, que está por acá. Entonces, aquí pesa si la polaridad, pero también pesa la interacción. No tiene ninguna interacción, verdad, este lo de no tiene ninguna interacción y el naftaleno, doble núcleo aromático, tiene una interacción muy buena por su estructura plana. De acuerdo. Fíjense que en polisiloxano los órdenes de elución cambian completamente. Pasa a ser que sí, luego más rápidamente la acetona. Acetona, si bien tiene polaridad evidentemente, pero es muy volátil y la fase estacionaria no tiene una buena interacción, eh, con compuestos polares. Luego sigue el 12, trianal, por la misma razón, y recién, verdad, recién, eh, después del que es el 15, ahí está, después del 15 empiezan a aparecer los hidrocarburos, porque aquí lo que pesa en esta fase es básicamente la volatilidad. Pero el gran problema que tenemos en en esta mezcla en particular son, aquí veíamos el solapamiento de dos picos, compuesto. Aquí tenemos varios solapamientos, 19, 21, A, 22, trial, con el 10 es eleno, o sea, aquí hay que ver estrictamente los puntos de ebullición, vuelta, 19, 21, 124, está muy cerca, solamente presión de vapor y obviamente la en relación a todo el resto. Fíjense que aquí el que sale último tendría que ser el que tendría el punto más alto, este, y es el dodecano, que es uno de los que, como el naftaleno, no, no tiene interacción, el naftaleno, que es el 17, sale un poquito antes y sale el 27, decano, o sea, es el que tiene punto de ebullición más alto. ¿Entienden el concepto? Interacción, no interacción. La resolución es consecuencia de interacción. En este caso particular, la resolución parece irse a usar un glicol como fase estacionaria. Si no quiere trabajar en una sola corrida, también podría trabajar, dependiendo de lo que interesa. Si a mí me interesa el 24, verdad, el 24 está muy bien aquí, pero también está aquí. Podría elegir r. Ahora, si me interesa la, a ver, un de los líos, el 20, eh, aquí en el polisiloxano parece resolverse mejor que acá. Y así sucesivamente para cada par, verdad, que uno quiera trabajar. Bien, aquí se muestra. Ah, estaba finalmente. Aquí se muestra algo que se llama constantes de Marno. Constantes de Marno son, verdad, eh, el parámetro, o sea, se utiliza para seleccionar las polaridades. Entonces, lo que se hizo fue hacer una usar la diferencia del índice de este, ¿cómo se llama?, del índice que se define para establecer esa polaridad en relación al escualeno. Sí, entonces, este, el escualeno, escualano, escualano, escualano lineal, no tiene, este, ¿cómo se llama?, ninguna interacción con ninguna fase estacionaria, ningún analito tiene interacción con el escualano de vapor. Y en el caso de otra fase, verdad, la diferencia nos va a dar un valor siempre positivo. Aquí no hay ningún tipo de interacción, vapor. Y aquí va a haber esta, va a haber este, ¿cómo se llama?, eh, sí, algún tipo de interacción además de la de volatilidad, porque en cero y es lo que ocurre en la escala. No es todo cero. Y a medida que aumenta la polaridad, sí, carbo, por ejemplo, vemos los valores de cada uno de estos compuestos. Esto no nos lo van a dar como el criterio general es que a medida que se avanza o se desciende la columna, la polaridad de la columna de la fase estacionaria aumenta, o sea, sería el índice de retención que tiene el compuesto en una fase líquida determinada, que es la que me interesa evaluar con retención el escualano, que dijimos que es, ¿cómo se llama?, prácticamente cero en todos los casos. Entiende el valor de la constante de Marno para cada uno de los compuestos que se toman en esa mezcla. Hay distintas mezclas. Esta es la más simple y esta de 15 compuestos está por la diferencia entre la retención del compuesto, cada uno de estos en la fase correspondiente que estamos estudiando, menos el valor en el escualano, okay. Y la otra cosa que vemos es las temperaturas, la menor y la superior en cada caso, que la variación es bastante interesante. A medida que aumenta la diferencia de índice de retención para una sonda, tomando como sonda una de estas mezclas, verdad, en una fase líquida, escualano aumenta la interacción específica asociada a esa a esa mezcla particular. El efecto acumulativo vemos todo para cada una de las, una medida de la polaridad de general de la fase estacionaria. Entonces, por se cada compuesto por esto, butanol, pentano y esto que se ve acá abajo es el escualano, alcano, es de acuerdo, bas la polaridad de aproximadamente 400 fases disponibles, solo utilizan muy pocas. Son muy pocas las que se utilizan. Tampoco se ve para tampoco. Cada empresa le pone su nombre, por ejemplo, qué más, está la naturaleza química, temperaturas máximas, mayor número, mayor polaridad, o sea, que yo tomo para cada compuesto, cuanto mayor el número, va a ser la polaridad. Entonces, en términos generales, estas columnas son las más polares, descendiendo en la escala que se utiliza. Se entiende, ¿verdad? Reinos relaciona la interacción de cada una de las fases estacionarias con la una mezcla de analitos, verdad, que están seleccionados de acuerdo a sus distintos tipos de interacción que es conocida.
¿Qué problemas hay en el funcionamiento de las columnas capilares? O sea, después de todo esto que acabamos de hablar de selección de las fases por las interacciones y demás, parece un rompecabezas. Si lo leen detenidamente, detenidamente, van a ver que en realidad está es muy lógico lo que se propone y es el resultado de un trabajo importante para evitar las discrepancias, verdad, en la oferta de fase estacionaria por parte de proveedores, representantes, redondeadores. No hay aún cuando los procesos de fabricación de columnas son automáticamente automatizados. Eso implica desde la generación del tubo de sílica fundida hasta su recubrimiento con poliamida, hasta la colocación de la fase estacionaria y su ligado químicamente. Y entre sí, no hay dos columnas iguales. Obviamente, un tubo generará 100, 200, 40, 30, no sé, columnas. Estoy al tanto hace tiempo que una fábrica, tengo un amigo conocido, fabrica columnas, he visitado, no tengo idea cuántas columnas se fabrican a partir de una. O sea, yo trabajo con columnas de 30 metros, a ver, tubos iniciales de 3000 metros, de 300 metros, ¿entienden? 100 metros, no lo sé. Una tanda de columnas que sea más o menos parecida, pero no todas. Y entre fabricantes, las diferencias también pueden ser diferentes. La misma fase estacionaria y similares, en consecuencia, hubo que establecer un criterio de armonización, homogeneidad entre, digamos, para chequear las distintas fases, porque este para evitar errores, malos entendidos y cuartito las constantes. De cualquier manera, yo quiero, eso vale con vale para una columna nueva. Después, cuando empieza a fallar una columna, obviamente parte del envejecimiento, parte de los tratamientos térmicos, parte de las muestras, produce cambios en la fase estacionaria. Así que la mezcla que se nos suministra normalmente o los cromatogramas para la mezcla correspondiente que nosotros corremos en las condiciones que indican para verificar estas constantes, grado de polaridad de cada columna, es conveniente repetirla con el tiempo, con cierta periodicidad. En nuestros laboratorios, si no tenemos la mezcla, nos podemos construir una. El año pasado, en el laboratorio de espectrometría de masa, de G6, masa, eh, hicimos una, inventamos una mezcla que como ninguno, un poquito de compuesto, la pudimos encontrar. Inventamos una mezcla de 12, 14 compuestos que tenían justamente, cumplían con los requisitos estos. Y cambiando los programas, cambiando las fases estacionarias, cambiando los programas de temperatura, cambiando, era una cosa increíble como se movilizó. Entonces, tengan en cuenta también, por ejemplo, en el caso de los inyectores automáticos, también es conveniente ser un blanco positivo de la entidad, o sea, la estabilidad de la columna de performance con una mezcla.
¿Cuáles son las fallas en el funcionamiento de las columnas capilares? Esta maravilla. La ruptura de las columnas, el sangrado, o sea, que la columna se rompa. Sabemos por qué da fallas de, bueno, por bestia, o sea, por problema mecánico cuando coloca, por mala colocación, por mal manejo, mal uso. Sangrado de la columna, daños térmicos, daños por oxígeno y daño químico. No hablamos obviamente de daños químicos, como por ejemplo, aquel que se le ocurrió inyectar ácido clorhídrico o sulfúrico o, ¿qué puedo decir?, acetilo. O sea, hay cosas que no se pueden hacer. Bueno, eso está por encima de todo el concepto de por qué se rompen las columnas. Las columnas de sílica fundida puedes hacer una moña, no hay problema, es flexible, se puede instalar, no hay ningún problema, pero el manejo puede lo raramente en el futuro y no en el momento de la inyección. Es decir, cuero cuando uno se guardan. Cómo se cortan, se abren las columnas con un objeto filoso, normalmente uno de cerámica o de plástico filoso. No hay ningún problema. Se hay que evitar de frotar la poliamida, pero muchas veces si nosotros rozamos la columna agresivamente, verdad, o sea, la maltratamos, nosotros no vamos a ver el daño en lo inmediato, pero probablemente se pueda producir, ver una falla acelerada. Ahí está. Si se desgasta o araña la poliamida con otras, con las vibraciones del del horno, o sea, 90% de los hornos, los nuevos que ya habíamos turbinas, pero los que tienen turbinas en el horno para hacer todo, parte de llama, provoca que se puedan roturas de la columna, justamente porque las columnas están colocadas muchas veces sobre los mismos soportes de las de las turbinas y como están fijas a la hora del horno, algunas vibraciones las pueden dañar. Eso es muy raro. Las columnas muchas veces vienen con etiquetas de identificación, verdad, que las pueden dañar, cubriendo los ventiladores, borde metálico en el horno, o sea, que cuando uno el horno está, está pensado y la columna viene.
Enrollada como para no ser macana, pero como siempre hay que desenrollar un pedazo para comodidad, es posible que se produzcan daños. Manipulación, cuidados. Si una se rompe, vaso medio lleno. Puede que no se vuelva completamente una pérdida.
TR cu vueltas la columna, cu vueltas de 1 metro. Metro algo este bajamos número pl teórico, pero no disminuye en forma significativa la resolución. Bueno, F que otra posibilidad es que la columna se calentó sin gas. A eso se refiere daños térmicos. Fundamental lo primero que hay que hacer en un cromatógrafo, importa sistema in, nada. Lo primero que hay que hacer es abrir la vva dease mó, teniendo fase mó. Otra vez, respetando las temperaturas, la columna no va a sufrir nada. A qué se refiere esto, las móviles son mágicas. No se refiere a que si yo tu un flujo de gas dentro de un tubo, de acuerdo. Yo voy a tratar, yo lo que tengo además es un sistema de homogeneización de la temperatura. Tubo si no tengo gas, verdad, se van a producir calentamientos Lama enfocados, focalizados y me va a dañar partes o toda la.
Por qué las columnas sangran. Bueno, como vimos ya, verdad, las capilares un material polimérico, fase estacionaria que está unido químicamente, inmovilizado químicamente a un po, un po. Entonces hay ruptura, polimerización, verad, esencia, oxígeno, rano, que es lo que se muestra acá. Y esto se cataliza a temperaturas elevadas, aunque también se pu producir temperatura, perón, la temperatura elevada. Esto que ustedes ven acá son, por ejemplo, esto es un polimetil siloxano, polisiloxano, metil siloxano, potil siloxano y lo que se produce, verdad, son este tipo de reacciones que van a dar lugar entonces a este tipo de productos. En un espectrómetro, esto lo veríamos como la, lo que estamos viendo acá, pero en un espectrómetro de masa podemos ver 207, 281, 355, 73, que es el silicio etilos. Eso es típico de que está indicando una, un sangrado de la columna para este tipo de fases pocop pooles.
Esto es del Líbero. La pregunta que se ocurre en este momento es lo siguiente. Fíjense, esto es real, esto está pasando. Nosotros tenemos un inyector automático, tenemos este una columna de eh polión de carbo, o sea que de siloxano cero nada está unida químicamente a sía. Sía la sílica no se le, como es posible que nos aparezca permanentemente 73, 261 y 255. Esto es que si les aparece esta situación, hay que hacer primero mirar de la columna hacia atrás, hacia delante está el detector, hacia atrás. Aquí está el liner, la zona de volatilización. Los Liner se desactivan y se silanized haber restos de silanol, de metil silanol que estén saliendo. No es el caso. Cambiamos el lineos. Más atrás, más atrás está la aguja. La aguja tiene puntad inoxidables de vidrio de Blas. ¿Qué pasa? Nos dimos cuenta, estamos trabajando con microestacion en fase sólida, se acuerdo que ya lo vimos, y estamos trabajando con una fase poco polar, silanes, polisiloxanos. Consecuencia, tenemos un problema con la fibra, se nos están rompiendo las fibras o se nos están despolimeriza. Es decir, que el análisis de un problema normalmente se hace rápido cuando uno tiene una idea de de lo que ocurre.
Entonces losos cíclicos formados son volátiles, seyen de la columna como sangrados, sefan una línea de base ascendente y nunca como picos individuales en de base. En espectrometría de base de masa sí se pueden ver picos estos. Y bueno, acá se muestra el ejemplo de sangrado para una columna, verdad, este, las dos son de una de 30 metros interno, en fin, eh, no interesa el tipo, pero se ven como que los sangrados son diferentes de acuerdo a la fase estacionaria. Y en este caso con detector de masa se veían los iones que indican, verdad, los sangrados de ano, 2, 355. Se puede, depende del rango de masa. El es un proco continuo, es decir, por eso es que normalmente no se ven picos, porque eh ocurre que por esama sangrado está continuamente saliendo poiz.
Bueno, que habamos tapar las columnas en cajas, cataliza para formar las columnas, se hace con temperatur alaras. Aquí se muestra como se concepta evitar la radiación, evitar esencia de oxígeno, si taparla, básicamente son una cosa más fácil. Tapo los extremos, guardo la columna. Otra cosa, en la reinstalación de la columna es importante deshacerse de los productos de sangrado formados durante el almacenamiento para garantizar los niveles más bajos de ruido y desplazamiento la línea base, se que no haya deriva y que no tenga. Esto se hace con lasas que se sacaron y con las nuevas que se o sea, las que sacar y se recoloca con las nuevas que se están instalando. El acondicionamiento se logra, verdad, mediante se eleva ligeramente por encima de la temperatura de trabajo superior. Y esta es una teoría, se deja allí dur un periodo de tiempo para cruzar los productos exp pasoe mó, la columna nada y lo que hago es permitir que salgan todos estos. Una práctica útil es de nuevas dejar el extremo que unido detector sin conectar. De esa manera yo mecio el detector con tod est.
Esta es las teorías. La otra teoría, esto como cada uno tiene su libro, es el que corre, corro un programa, programa de temperatura dees que utilizamos conectada y entonces de esa manera se el tratamiento, ya sea una columna elevada por un tiempo o un temperatura, minutos más o menos el final columna y el nivel de monómeros o que quedar en la Fabric de la columna o que pudent. Bueno, y aquí como, bueno, acá hayo es una revista, si les interesa que a los fanáticos pueden, este es gratis, tienen que postular y te hacen gratis, te da mucha información. Bueno, aquí hay algunas cosas interesantes dequ de cómo trabajar el daño térmico. Se vimos, este que vimos acá fue sangrado. ¿Qué pasa con los daños térmicos? El rango de temperatura de las columnas que ya hablamos y, eh, bueno, esto ya se explicó, verdad, por debajo, eso para límite superior, por debajo del límite inferior. Temperatura, est temperatura muy bajas, acer límite inferior, pier prop y en algunos casos se recupera. Pero como dice acá, aquí no se produce daño permanente. Si la comuna está expuesta a temperaturas inferior con ciertos límites, se pueden cristalizar la fase, aunque estén ligadas químicamente en las paredes y eso puede producir algunas modificaciones, pero en general las columnas por debajo de la temperatura se recuperan bastante bien. Está raro que alguien si yo tengo trabajar la temperatura, hayum trabajan 20 grados y estoy, este, estoy fining Pingüino en el laborator, está todo muy bajo, es muy difícil porque Elo tiene su térmica, pero supongamos que en la noche pobre queda solo abandonado y triste, eh, no va a haber un daño. Bajas, trabaja men 60 grados, bueno, se comprende y la pobre columa tiene derecho a reclamar.
Lo que les decía, límite temperatura superior, generalmente se da como dos números. La primera temperatura, en este caso 325, se llama lmite isno, la temperatura más alta, la que la bloma puede estar expuesta durante periodos de tiempo indefinidos, larg. La segunda temperatura se llama límite del progama temperatur, lae dejar 10, 15 segundos. Obviamente, como todo con criterio, insistimos, la no tiene gend dao químico, básicamente repetir.
Este otra de las cosas que tiene que ver con esto, acá no se dice, ya lo dijimos antes, que las fases, las fases móviles deben, se dijo, deben estar tratadas, es decir, deben tener sistemas de retención de humedad, de oxígeno. Y si se trabaja, trabaja con aire de tanques, Ban filtros y se trabaja con aire de compresores, hay que colocar también filtros de aceite. Se trabaja con compresores libres de, son los mayormente utilizamos todos, pero si ustedes están instalando en una fábrica, están instalando, tenemos un compresor 20 koner F de aceite, esos compresores no son tan en cuenta. Entonces que la fase móvil también debe ser [Música] unificada.
Problema hidrógeno, estamos usando hidrógeno, hidrógeno está perdiendo agua. Os estamos tratando de resolverlo porque no es un problema de generador de fábrica del modelo y este no pensábamos poner nada en el medio por no el tema de las caídas de presión y pocos compuestos puede dañar la fase estacionaria, verdad. E, los compuestos no volátiles, no volátiles, contamin, que no se puedar ría, contamin una columna y pueden afectar negativamente la cromatografía, evidentemente, pero no van a atacar niu fí, salvo que uno se c algunas combinaciones de solvente y compuesto pueden no ser compatibles. Entonces, este, el tener en cuenta, no. Y una aclaración bajista que está ahí abajo, que ha que decir en un poquito voz bajita, las bases, las fases estacionarias que están ligadas a la cica internas y Cross link, o sea, que las edes vieron también, no son dañadas por el agua. Lo deci bajito porque la forma que la gente antes sí, cuando estaba solo unidos químicamente, el agua les afectaba mucho. Solventes, entonces, ah, decí, no cuidado, no inyectes agua. Ahora puedes inar, tenés el problema de Flash, pero bueno, puedes inyectar agua, pero este, tratamos de no facilitar las cosas porque por eso mismo F que el problema es mundial o por algo se está trabajando en cosas como el líquido iónico que le permite a la gente, por ejemplo, una aplicación de libro, trabajar con perfumes. Los perfumes son agua adentro. Cada vez que vos ex trés cambias o introducí una fuente de error, entonces se trata de Dear directamente conectaban directamente este con el agua y hacían, nadie se acuerda que tiene quear mucho menos, pero se puede.
Las columnas capilares se pueden lavar, verdad. Eh, no es una práctica recomendable, pero se pueden enjuagar con solvent, verdad. Es decir, aquí hay una forma muy muy práctica de hacerlo, enjuagado, verdad, este funciona. Eh, el tema que normalmente cuando uno lava las columnas, verdad, es porque hizo aluna macana grande. Si una columna no se recupera, bueno, algo que no entrado, si lo puedo salvar, intento. Normalmente no da resultado, pero intentado. Forma parte de cuando se elige, entonces la fase líquida, que es la fase estacionaria inoga gaseosa, se deben considerar unos criterios fundamentales que son los resum. V, fase líquida selectiva. Si el componente separada factor selectividad, habrá una relación inversible entre la fase líquida y las componentes en la mezcla separada. Si la hay alguna interacción Irreversible, o sea, formación de enlace covalente, verdad, no hay separación que valga, eso se quedó ahí. La base, la fase líquida tiene una baja presión de vapor a la temperatura de funcionamiento, de acuerdo. Es decir, eh, no se va a degradar temperatura, es técnicamente estable. Bueno, la en el ha este como a partir de la de las reinold, señor grow, la familia grow, que es una familía muchísimo, verdad, creo, este, cómo se llama, este test gl, que es básicamente lo que entregan como una columna, ver, para ver justamente las el compuesto de referencia que sabemos que os lineales no tienen interacción, no tienen interacción con sean lineales, no tien interacción con la fase estacionaria. Éteres de distinto 10, 11 y 12, alcoholes, un alcohol primario, secundario, aldeido, una arina metilada, fenol metilado y demás. Entonces, con eso se tiene una idea del funcionamiento de la columna. Y eso las mezclas, verdad, que surgieron a partir de constantes reinos, a partir de eso, estos test creamos nosotros nuestro propio tests. Interesante, es una cosa interesante y lo que nos permite entonces las columnas de su acerca de su correcto funcionamiento.
Bueno, lo que est cómo estable una escala de polaridad. El criterio de cromatografía asosa, los parámetros como el tiempo de retención y el tiempo de retención ajustado aado por tiempo muerto pueden ser utilizados, pero están sujetos demas variables, o sea, la variación que existe en los tiempos de retención son muy grandes porque hay pulsaciones enas de gases móvil, porque podemos estar trabajando con cromatógrafos que no tengan una buena estabilidad térmica en los hornos, problema, en fin, lo que sea. Okay, entonces la escala necesitamos una escala de Po. El concepto de inter tensión fue introducido por un señor Coat, indica que el índice de r tensión y índice de retención de un compuesto es un valor relativo, ver, en relación con la retención de una serie homóloga de en elcanos, o sea, los en elcanos no tiene ninguna interacción con ningún tipo de fase estacionaria, su tiempo r tensión derive exclusivamente de su volatilidad, es decir, de su molecular, es decir, de átomos de carbono. Entonces, lo que se hace es se toma eso como una valor relativo. Se el í de retención se define como el número de carbonos del alcano cualquiera por 100. Ya, entonces, lo que yo hago es hacer una, cómo se llama, una interpolación, o sea, yo hago gráfico de los índices de retención distintos alcanos, 8, 9, 10, 11, 800, 9. Hacer bajo, nosotros trabajamos entre c9, entre 900 y C 2600. Entonces, los compuestos están en esa zona. Entonces, lo que la Gráfica y luego y luego en este caso logarítmico, vamos a ver, se puedar también, luego, este, con el tiempo de retención, voy a ver tensión corresponde y eso es lo que yo voy a utilizar para finos.
Esto se estableció para termo, verdad, los í tensión. Fíjense que el í tensión está dado por 100 por Z, el número, número de átomos de carbono de alcano, o sea, va siempre el analito va a tener un alcano delante, un alcano atrás, puede ha más saladitos en el medio, siempre uno adelante y un el número Z es el número de átomos de carbono que está luye antes, los tiempos de retención del alcano que luye antes del analito, el que eluye luego y este es el tiempo de retención del analito. Okay, es un interpolación, saco el valor del índice de retención de, los índices de retención dependen únicamente la temperatura de la columna y el tipo de fas, pero no son, pero son, perón, independientes de la longitud de la columna, la relación de fase, el Gas Car y la velocidad lineal, enti. Entonces, se han tabulado en general, no solamente para idar compuesto, también para cal tiempo retención deito, si qui decir dónde saldrá, puedo llegar a saberlo. Si tengo una mezcla y tón, puedo saber al revés, rés, dónde podría salir en caso isotermo, pero cuando como la mayor parte de las cosas de las separaciones análisis temperatura, estos señores 63.
El concepto de índice retención lineal, el índice de retención lineal es se muestra una interp l con las mism característic carbono el alcano que está delante del problema que podemos aportar tiempo rón Alo anterior del alcano posterior, esto una interpolación de la Gráfica Ob tenemos del problema y por lo tanto se llama adicional de identificación. Normalmente quies trabajamos enestos voles ten que demostrar que una tabla de composición de lo que sea ten que presentar una tabla donde digas determinada los compuestos y el tiempo el tiempo de retención nadie lo pone el índice de retención lineal correspondiente a ese compuesto calculado y teórico, o sea, lo que vos calculaste por mezcla propia, las interpolaciones, una ecuación, una hoja exel, un minuto y además los datos los saca el software directamente y ya tenés tensión práctico el tuyo, índice de retención teórico, es decir, el que está informado en la literatura, hay bases de datos y luego el compuesto que corresponde. Aquí aparece un pequeño problemita, eh, ¿qué es? ¿Por qué se esen los alcanos? Bueno, ya lo explicamos varias veces. El problema que que tenemos son, bueno, problemas de asimetría, bueno, no está bien resuelto, es un problema de base, pero uno de los problemas que tenemos es que, eh, la fases polares, como por ejemplo, las casas ID, la fase estacionaria, o sea, el intercambio polar, da resultado picos asimétricos, verdad, y al un efecto deción. Entonces, el problema que tenemos que la variabilidad, en pocas palabras, la variabilidad de los índices de los tiempos de retención en fases estacionarias polares es mucho mayor que en fases estacionarias polares. Consecuencia, los índices de retención lineal de los compuestos zitos en fases estacionarias polares tienen mayor variación que las no polares. Para que tengan una idea, en una fase como lo usamos nosotros de ano meano, nosotros tenemos una variedad de más menos 10, o un valor de 1540 puede ser 1530 o 1550, pero es es el rango. En polar tenemos más menos, o sea, ejemplo, 1540, 1590 o este 14. Quiere decir que el número de compuestos que aparece en el rango de es aparte que inter grande, por lo tanto, yo necesito otra por eso lo que les decía, otra herramienta de identificación que para caracterizar que garantizar que ese compuesto que yo estoy identificando es ese y no otro que est dentro de ese Rango. Hay dudas, no siento dudas.
Bueno, Los criterios de selección para fase estacionaria es primero información previa, o sea, le pregunto a mi vecino, le pregunto alado, literatura y la adapto. Selectividad, determinar el tipo de interacción potencial entre el compuesto analito, la fas estacional. Presión Bipolar, como dijimos, que lo hacemos por índices de cobat, que lo vamos a aplicar sobre algunos compuestos y definimos las constantes de Mar reino y a partir de eso establecemos las mezclas de Los t de grow para trabajar. Eh, polaridad, fas estad. Este es un criterio genérico, utilizar la fase estacionaria más no polar, o sea, la menos polar que permita la separación. Por qué, porque ya vimos que cuanto menos polar sea, menos variabilidad vamos a tener en los tiempo de retención. Ustedes quier más certeza, vamos a tener en la identificación de los. El tiempo de análisis, algunas fases estacionarias dan separaciones satisfatorios tiempo de, o sea, no solamente los parámetros operacionales, sino que yo tengo que saber qué quiero separar y qué no. No me interesa si se separa o no se separa. Esto tiene consecuencias en la parte de análisis cuantitativo, pero eso no lo vamos a ver, estamos hablando solamente de resolución, porque les adelanto la historia, si yo estoy haciendo un análisis, verdad, en el cual tomo las áreas, verdad, para como medido de contenido pico, el área bajo un pico debe ser proporcional al contenido que está moléculas que está dentro de la mezcla. Entonces, yo digo, bueno, ver, sumo todas las áreas y divido cada área la suma total y me da un porcentaje, fantástico, ningún problema. ¿Cuál es el problema en este caso? Yo tengo que tener todas las áreas para poder tener ese porcentaje. ¿Cuántas áreas son todas las áreas? Y si hay co elusión, eso es. Pero en este momento no.
Límite de temperatura en la selección de fase estacionaria. Compuesto con altos puntos de posición o peso mular, altas temperatura, muy largos. Los límites de temperatura menores para fases estacionarias polares restringen su uso. Compuesto con bajo medio punto de ón, o sea, eh, como la fase estacionarias en cristiano, las fases estacionarias polares, eh, como se llama, tienen límite de temperatura trabajo más bajos. Hay restricción con compuestos que tengan muy alto. Y más algú si componente tiene que tener en cuenta la actividad de cada compuesto. Las columnas con fase estacionarias no pones son las más ines. Con fases polares se pueden experimentar, o sea, son las colas picos que no son simétricos, sino que luego que salen se alargad como una cosa alarg, es muy difíciles de integrar, muy difícil de tener el tiempo de retención promedio del pico, que es justamente lo que nos permite tensión. Hay que tener en cuenta la capacidad de las fases estacionales. Las fases estacionales similares en polaridad a los compuestos a separar tiene mayor capacidad para su compuestos, o sea, cuanto más similar sea la, cómo se llama, las naturalezas de polaridad como hemos definido entre fase estacionaria y analito, recordar que la fase móvil enosa es inerte, el equilibrio va a tener es una partición, o sea, va dar mayor afinidad de partición para ese tipo compo. Yo elijo bien, verdad, esa esa interacción y esa partición va a ser favorable a mi sangrado. Gener las fac presentaciones nopes tienen menos sangrado, verdad, pero además el máximo sangrado ocurre temperaturas mayores, o sea, tiene tolerancia mayores temperaturas, se sangra men.
Detectores selectivos en la elección de las fases estacionales se deben evitar, verdad, aquellas fases que tengan especies o grupos funcionales que generan una fuerte respuesta dor selectiv. Si eso ocurre, por ejemplo, si yo tengo nitró, fósforo, trabajando con nitrilos, con cian derivad, fas Conan derivad, puedo tener problemas, tener problema y el efecto son derivas muy grandes, ruido, porque por poco que sangre la columna, algo va a perderse y va si selectivo y es afectado el SD también de la natur electrónica, verdad, vamos a tener ese tipo. Que las fases estacionarias sean Versátiles, es decir, eh, tratar como les decía de tener una fase estacionaria, poca fase estacionaria, verdad, nosotros somos dos, poco polar y Polar, de tal manera de, eh, como se llama, evitar tener material que no se utiliza. Las fase, las columnas se envejecen, fases se envejecen, verdad, y empiezan a tener problemas. Okay, bien, como no hay dudas, los, eh, lo discutimos en una clase presencial. Aguo que ha sido entendible, entreteni y no Sopor. No vemos.