Enzimas

Hola, hola, ¿cómo están? Espero que se encuentren muy bien.

Bueno, en esta oportunidad vamos a hablar de enzimas, cómo las medimos en el laboratorio, cuáles son las enzimas más importantes, qué funciones tienen, en fin.

Bien, esta es la bibliografía que siempre se utiliza para estos teóricos y tenemos que definir las enzimas. ¿Qué son las enzimas? Son proteínas, ¿sí? Ya se vio que su esqueleto está formado por diferentes aminoácidos y son catalizadores biológicos. ¿Qué significa esto? Significa que aceleran la velocidad de las reacciones químicas.

Acá yo les traje un ejemplo, como lo verde intenta hacer una enzima, lo rojo unido intenta hacer un sustrato que cuando la enzima toma, este se acerca el sustrato es capaz de doblarlo en un producto de una manera más rápida. Si ustedes ven acá, observan el sustrato transformándose en producto sin la participación de las enzimas. Entonces ustedes ven que los tiempos que le lleva al metabolismo pasar de sustrato a producto son muchísimo más lentos y serían incompatibles con la vida. Las enzimas, en ese sentido, vienen a solucionar este problema para que el pasaje de sustrato a producto sea más rápido.

Además de tener enzimas que nosotros podemos medir, podemos utilizar las enzimas como reactivos. Acá les traje un ejemplo. Por ejemplo, cuando medimos los triglicéridos, eh, para poder medir los triglicéridos en laboratorio se hacen, se, o sea, se enfrentan a los triglicéridos a diferentes enzimas. En este caso son reacciones acopladas que las vamos a profundizar más adelante, pero en definitiva termino obteniendo un producto, en este caso coloreado, que puedo medir a través de espectrofotometría. En en esta reacción química participan tres enzimas y vieron que se puede utilizar las enzimas para medirlas o, en este caso, las estamos utilizando para que formen parte como reactivo.

Por ser proteínas, cumplen con la estructura primaria, secundaria, terciaria, con su conformación activa, que esto lo vamos a profundizar cuando veamos proteínas y son satures. Vamos a ver que las enzimas, al tener un solo sitio activo donde puede este catalizar el sustrato, lo hace a la vez, de un sustrato a la vez. Es por eso que decimos que las enzimas son satures.

Acá lo que tenemos son diferentes partes de las enzimas. Cuando la enzima va a hacer su trabajo de catalizar un sustrato hacia un producto, para trabajar, muchas veces la enzima que está acá marcada con color verde, necesita de algún grupo prostético, que puede ser un ion. Por ejemplo, los iones que más participan son el calcio, son el magnesio, o puede ser alguna otra molécula que se conoce como coenzima, que ayudan a la enzima a poder hacer su trabajo y a catalizar el sustrato en producto. Cuando nosotros tenemos esta imagen, que está la enzima unida a su grupo, a su grupo prostético, decimos que es una holoenzima, y cuando la enzima no tiene a su grupo prostético, decimos que estamos frente a la parte proteica de la enzima, que se llama apoenzima o apoproteína.

Esto se los dejo ahí para que ustedes lo puedan leer. He sacado del libro Leninger de Principios de Bioquímica, que es son estas definiciones que les comentaba anteriormente.

Tenemos que por encima hay un sitio activo que es específico. Ahora vamos a ver lo que le da especificidad a este sitio activo, que justamente se encarga de reconocer al sustrato para poder catalizarlo y transformarlo en producto.

Acá, por ejemplo, les traigo una pregunta que les pueden hacer. Esto sacado de diferentes evaluaciones que dicen: "Las coenzimas son formas estructuralmente diferentes que catalizan la misma reacción." Bien, esto que es algo estructuralmente diferente y cataliza la misma reacción, se denomina isoenzima, ¿ya está? O isoforma. Tendríamos que después profundizar un poquito más en esta parte de la afirmación. Las coenzimas, en realidad, no catalizan ningún tipo de reacción. Ayudan, ayudan a que la enzima principal catalice la reacción principal. Está. Por eso acá se puso falso y se puso un tic. Acá les traigo este cómo se respondería esta pregunta.

¿Qué más tenemos por acá? En esta presentación les traigo específicamente el análisis del sitio activo. ¿Por qué el sitio activo decimos que es específico para la enzima? Bueno, este sitio activo, acá intento dibujarlo con estas pelotitas, son aminoácidos. Es una secuencia de aminoácidos específica que por complementariedad el sustrato encaja directamente acá. Esto es justamente lo que le da especificidad. Esto, esta secuencia de aminoácidos. Acá, por ejemplo, les traigo alguno de ellos. Tienen diferentes cadenas laterales los aminoácidos que le dan carga, ¿está? Entonces, esta parte del sitio activo también tiene una especie de atracción por el sustrato que favorece esta interacción. Entonces, cuando esto sucede, se favorece el encastramiento, por así decirlo, del sustrato en lo que es el sitio activo de la enzima y después la enzima hace su trabajo de transformarlo en producto, ¿no? Así es como funciona esta parte catalítica del sitio activo, que es la que reconoce al sustrato.

E, bueno, acá es un poco lo mismo. El pH intracelular, eh, de alguna manera no favorece a que las moléculas realicen una transformación y las enzimas están para ayudar.

¿Qué sucede cuando uno intenta escribir lo que pasa en la reacción? Por un lado tiene la enzima, por un lado tiene el sustrato, por un momento transitorio se forma el complejo enzima-sustrato, por otro momento transitorio, antes de liberar el producto, la enzima lo tiene todavía en su sitio activo para después de cierta cantidad de milésimas de segundo volver a ser la enzima libre y el producto, este, como forma separada. Está.

Lo que les traigo acá arriba es eh lo que les estaba comentando anteriormente de la energía de activación. Lo vamos a ver en la presentación que viene. Acá, ¿qué sucede en esta línea que ustedes ven acá? Es la transformación de sustrato en producto. Ustedes ven que necesita una energía bastante mayor que cuando el sustrato se une a la enzima. Es por eso que se dice que el complejo enzima-sustrato, o mejor dicho, la enzima, lo que hace es pasar de sustrato a producto, facilitar el pasaje de la molécula de sustrato a producto disminuyendo la energía de activación, ¿Tá? Ustedes e pueden ver acá como, por ejemplo, cuando no hay enzima, la molécula que va a pasar de sustrato a producto sin ella empieza como a, como lo que está a la izquierda, romper enlaces, formar otros, cambiar cargas positivas por cargas negativas. Es como que se empieza a desestabilizar, generan nuevas interacciones hasta que llega a un nivel de energía que el sustrato se convierte en producto, ¿no? Pero necesita una gran energía para que eso suceda.

Cuando aparece lo que es la enzima, la enzima reconoce el sustrato, se une, forma producto, aún no lo libera porque recordemos que esto tiene ahí una porción de segundos de milésimas que es transitorio y después la enzima vuelve a quedar libre para ir a buscar más sustratos. Está. El objetivo acá con esta gráfica es que ustedes vean cómo las enzimas disminuyen la energía de activación para poder este pasar de sustrato a producto.

Entonces, una de las preguntas que puede surgir es que, bueno, nada, lo hagan completar e eh, ¿qué qué es lo que sucede en la línea punteada? ¿Qué es lo que sucede en la línea continua? Y también les pueden preguntar, bueno, ¿cuál es la reacción específicamente que se da? Que es lo que estuvimos hablando hace unos segundos, ¿no? Acá les dejo la verdadera.

Bien, otra cosa que pasaba es que teníamos problema con la nomenclatura. ¿Qué sucede? Había enzimas que tenían el mismo nombre, entonces uno no sabía bien a cuál se refería y había una misma enzima que tenía dos nombres. Entonces, de alguna manera, para que esto no sucediera más, la Unión Internacional de Bioquímica lo que hizo fue crear como una nomenclatura universal basado en la función. Se pusieron a ver que las enzimas tenían diferentes funciones de óxido-reducción, que transferían diferentes grupos de un sustrato hacia otro. Eh, bueno, en fin. Entonces decidieron darle diferentes números y hay clases y subclases.

Acá, por ejemplo, les traigo que la exoquinasa es el nombre que nosotros utilizamos vulgarmente para comunicarnos, pero cuando uno va a buscar el número clasificatorio, no es exoquinasa como tal, sino que es 2.7.1.1. ¿Qué significa esto? Bueno, dijeron, la exoquinasa, ¿qué es? Es una transferasa, ustedes ven acá, grupo dos, transferasa. Bien. Y dentro de la transferasa hay una subclase porque hay muchas enzimas que transfieren grupos. Hay algunas que transfieren grupos fósforo, hay otras que transfieren grupos hidroxilo. En este caso se clasificó como 2.7 porque el punto 7 es una subclase de transferasas que justamente era fosfotransferasa. Y después, bueno, hay algunas disquisiciones que en este caso tenemos que es una fosfotransferasa con un hidroxilo como aceptor y que, bueno, participa la glucosa. A ver, nadie les va a preguntar cuál es el número clasificatorio de la exoquinasa, pero sí tenemos que saber que para todos hablar en el mismo idioma y para lograr una mejor comunicación, existe una nomenclatura universal que justamente le da nombre a las enzimas basándose en gran medida en su función. Ah, es para de alguna manera evitar ambigüedades y que pasara esto, ¿no?, de que una enzima tenga dos nombres y muchas veces había un mismo nombre para enzimas distintas, ¿no?

Bien, esto sí es importante. Hay factores que interfieren en la velocidad de la enzima y esto hay que tenerlo muy en cuenta cuando uno, eh, cuando lo ve en la cubeta de reacción, empieza a entender por qué la enzima anda más lento o anda más rápido. ¿Qué sucede? La temperatura es un factor fundamental porque las enzimas tienen una temperatura óptima de actividad que es la misma que tenemos en el cuerpo a 37º. Por debajo de 37º la enzima trabaja más lenta, entonces, em, de alguna manera no cataliza a la misma velocidad. Es por eso que ustedes cuando vean las pruebas de laboratorio pueden hacerlo a 37º y a 25º y se van a dar cuenta que a 25º los valores de referencia son menores y esto no es casualidad, sino que la enzima, como está a una temperatura menor, trabaja más lento. Por otro lado, cuando yo aumento la temperatura mayor de 37º, la puedo desnaturalizar y ahí, en realidad, se me desnaturaliza la enzima, se me desnaturaliza el sitio activo, por ende, la enzima no puede funcionar. Por eso la velocidad de formación del producto, ustedes ven que disminuye drásticamente.

Otra cosa que afecta la velocidad es el pH. Si ustedes ven, por ejemplo, incluso esto es fundamental para aquellos que diseñan las condiciones de reacción, si voy a medir la fosfatasa ácida, ustedes ven que la máxima actividad es alrededor de un pH de 4, mientras que para la fosfatasa alcalina, el pH donde mejor tiene su desempeño es a un pH de 10. Ah, acá les traigo dos ejemplos más. Por ejemplo, la pepsina tiene un pH óptimo cercano a dos y la glucosa fosfatasa, más o menos, un, una velocidad de formación de productos, o sea, un pH óptimo al cual trabaja, más o menos de ocho, ¿está? Entonces, el pH y la temperatura son de alguna manera factores que influyen en la velocidad de las enzimas.

¿Qué otra cosa influye en la velocidad de la enzima? La concentración inicial de la enzima. Ustedes imagínense que si yo tengo solamente una enzima para todo ese sustrato que ustedes ven que está catalizando, la velocidad de formación del producto en el tiempo, en realidad, es como muy baja. Cuando uno agrega más enzima al sistema de reacción, sucede lo siguiente. En el primer segundo, ustedes ven que la pendiente que se obtiene es mucho más pronunciada a esta otra que está prácticamente acostada. Entonces, ¿qué otro factor interfiere en la velocidad de la enzima? La concentración inicial. ¿Qué otro factor interfiere en la velocidad de la enzima? La concentración de sustrato.

Y acá tenemos que hablar, porque si hablamos de enzimas, tenemos que hablar de estos dos señores, de Michaelis y Menten, que si bien nosotros en el laboratorio no utilizamos esta fórmula como tal, el hallazgo que ellos hicieron con la creación de esta curva nos pone a nosotros en la pista de cómo diseñar las condiciones de reacción para poder medir la enzima. ¿Qué fue lo que hicieron ellos? Bueno, ellos lo que hicieron fue, con concentraciones conocidas de enzima, ver la velocidad de la reacción a diferentes concentraciones de sustrato, que es lo que ustedes ven acá. Entonces, iniciaron con una concentración conocida de enzima, colocaron poco sustrato y vieron que la enzima iba por su sustrato, pero en realidad la velocidad de formación del producto no era tan pronunciada como vimos anteriormente. Esto sucede porque la cubeta para las enzimas y para el sustrato es gigante y hay un tema de probabilidad de encuentro. Ah, cuando yo tengo poco sustrato, hay poca probabilidad de encuentro, entonces es como que la velocidad de formación es más lenta, pero es porque a la enzima le cuesta buscar el sustrato porque hay muy poco.

¿Qué es lo que sucede? Agregaron más sustrato y se dieron cuenta que siempre con la misma concentración de enzima. Agregaron más sustrato y vieron que, bueno, que esa pendiente claramente se hacía más pronunciada. Agregaron aún más sustrato y lo que obtuvieron fue lo siguiente: una velocidad inicial bien pronunciada y después la enzima tiene que salir a buscar, ah, tiene que salir a buscar el sustrato que hay a la vuelta y se dieron cuenta que la gráfica tenía este comportamiento, que es la gráfica que ustedes ven acá. Cuando esto sucede es porque decimos que la enzima está saturada.

Y esto es muy importante porque la enseñanza que nos dejó a nosotros desde el laboratorio no es tanto la fórmula, porque ellos utilizan una concentración conocida de enzima y yo quiero medir la concentración de mi paciente, o sea, ya por ende la fórmula no me sirve. Pero es interesante que lo que ellos dejaron, el análisis de esta curva sugiere que la velocidad, lo que tengo escrito acá, la velocidad inicial de formación, o sea, esta pendiente acá, la velocidad de formación inicial del producto es proporcional a la cantidad de enzima, que es lo que a mí me interesa medir.

Entonces, en el laboratorio, cuando yo quiero medir una enzima, tengo que de alguna manera crear las condiciones de reacción para no medirla antes, porque si yo la mido a un tiempo muy muy rápido, me queda enzima sin reaccionar y tampoco me puedo demorar mucho porque entro en esta parte de la curva donde la enzima ya está saturada y en esta parte de la curva la velocidad de formación del producto no es proporcional a la cantidad de enzima. Está. El lugar donde yo debo medir en el laboratorio son en los primeros minutos o segundos de la reacción, donde justamente sucede eh lo que les estoy comentando: la velocidad de formación del producto es proporcional a la cantidad de enzima de la muestra.

Entonces, vamos a ver como, por ejemplo, en este inserto que yo les traigo acá, basándonos en esto que les decía anteriormente, el fabricante dice: "Bueno, se debe mezclar inmediatamente, o sea, la muestra y el reactivo y disparar simultáneamente el cronómetro, esperar 90 segundos y leer absorbancia inicial y luego a los 1 minuto, 2 minutos y 3 minutos de la primera lectura." Está, eh, lo que nos está transmitiendo el fabricante acá, que lo que quiere medir es la actividad enzimática en esta fase inicial, porque sabe qué: si se demora un poco más, entramos en esta parte de la curva donde, insisto con esto, la velocidad de formación del producto en esta zona no es proporcional a la cantidad de enzima.

¿Por qué se insiste y se insiste con esto? Porque no utilizamos la fórmula de Michaelis-Menten. Utilizamos para diseñar nuestras técnicas estos principios que ellos obtuvieron de cinética enzimática. Ustedes ven que acá la curva tiene como dos fases bien marcadas: una fase inicial y una segunda fase donde la velocidad de aparición del producto prácticamente no cambia. Y esto hace que nosotros podamos decir reacciones de orden uno o cinética de orden uno o cinética de orden cero.

¿Qué pasa? Se le llama cinética de orden uno, cuando está escrito acá, cuando ustedes ven que la velocidad de aparición del producto es proporcional a la concentración de sustrato, está. Ven acá, cuando yo aumento el sustrato, aumenta la velocidad de aparición del producto de manera lineal. Ahora, cuando entramos en esta parte de la curva, decimos que estamos en cinética de orden cero, porque ustedes ven que acá la velocidad de reacción no es dependiente de la cantidad de sustrato, como acá. La velocidad de reacción en orden cero es independiente de la concentración de sustrato. Yo, por más que aumente en esta zona o disminuya la cantidad de sustrato, ustedes ven que la velocidad de aparición del producto no cambia absolutamente para nada.

Lo interesante de esto es que para nosotros en el laboratorio poder medir esta fase inicial sin medirla cuando ya la velocidad del producto está prácticamente acostada, yo debo saturar la enzima. Porque si yo saturo a la enzima, lo que hago es, de alguna manera, me, y si si yo la saturo y mido en los primeros minutos, estoy midiendo en esta fase lineal. Pero para medir en esta fase lineal, yo la tengo que saturar. Ah, tengo que tener la precaución de medirla en este punto, pero sin pasarme este para esta zona de la gráfica, que este no ya no estaría siendo fiel a la hora de decir que el producto es proporcional a la cantidad de enzima.

En suma, ¿qué es lo que quiero decir con esto? Nosotros en el laboratorio para medir enzimas utilizamos cinética de orden cero, donde la enzima está prácticamente y totalmente saturada y medimos en lo que es la fase lineal. Esto más o menos es lo que está escrito por acá arriba.

Bien, acá les traigo, por ejemplo, preguntas de alguna prueba antigua que encontré y dice: "En una reacción de primer orden, estamos acá abajo, a bajas concentraciones de sustrato, o sea, acá existe una relación directa entre la concentración de sustrato y la velocidad de reacción." Y en realidad, ustedes ven que eso es verdadero, porque a bajas concentraciones de sustrato, hay una relación directa entre la concentración de sustrato y la velocidad de reacción. Por eso acá se puso que es falso, pero en realidad esto es verdadero. Ah, estas son algunas preguntas que les pueden llegar a ser o otras cosas.

Bueno, con respecto a la cinética enzimática, defina el concepto de orden cero con respecto a la concentración de sustrato. Cinética de orden cero, lo que vimos recién, significa que la velocidad de la enzima es independiente, estamos acá arriba, independiente de la concentración de sustrato. En este punto la enzima está totalmente saturada y a velocidad máxima. Ah, alguna de las cuestiones, alguna de las preguntas que se pueden llegar a encontrar con respecto a este tema de orden cero y de orden uno.

Bien, otras cosas que nos pueden preguntar, bueno, cuatro factores que afecten la actividad enzimática. Acá los tiene, fue los que hablamos hace instantes nada más.

¿Y qué es lo que sucede? Si bien insisto con esto, nosotros no trabajamos con esta fórmula, tenemos que desglosarla porque ya les digo, si hablamos de enzimas, tenemos que hablar de Michaelis-Menten y tenemos que hablar de esta forma, de esta fórmula. ¿Qué es lo que pasa? E, ellos podían de alguna manera conocer esta velocidad inicial o velocidad de aparición del producto, siempre y cuando la concentración de enzima fuera conocida y tenían en cuenta esta fórmula. ¿Qué me dice esta fórmula? Bueno, ellos para averiguar esta velocidad inicial necesitaban la velocidad máxima de la enzima, que esto ya está estudiado y ya está escrito en tablas. Necesitaban también conocer la cantidad de sustrato que le estaban colocando a la enzima y necesitaban saber el Km, que es lo que vamos a profundizar ahora. Está. Con estos tres datos, ellos eran capaces de alguna manera, con concentración conocida, saber cuál es la velocidad de aparición del producto.

Entonces, vamos a hablar un poquito del Km, porque en realidad la velocidad máxima está en tablas y la concentración de sustrato, e, la puedo obtener porque yo soy quien le pongo sustrato, entonces yo conozco ese valor. El Km es de alguna manera un grado de afinidad que tiene la enzima por su sustrato. ¿Qué es lo que sucede? Se define estrictamente, el Km es la concentración de sustrato. Es una concentración donde la enzima está saturada al 50%. Acá les muestro una gráfica que ahora la vamos a profundizar un poquito más adelante, pero así es como se define el Km y ahora se los voy a mostrar.

¿Qué pasa en nuestro cuerpo? Hay diferentes enzimas que catalizan la misma reacción. Acá les traigo un ejemplo de ello. Tenemos la exoquinasa, que está preferentemente en el músculo, y la glucoquinasa, que está preferentemente en el hígado. Dos enzimas que catalizan la misma reacción y van a ir a buscar a la molécula de glucosa. Pero miren esto. Cuando yo le doy play acá, ustedes ven que la exoquinasa va a buscar a la glucosa de manera más rápida que la glucoquinasa. Entonces decimos que la exoquinasa tiene una afinidad superior. Si ustedes ven acá, acá tenemos el 100% de saturación, el 50% sería más o menos por acá. Y cuando yo quiero bajar a encontrar la concentración a la cual la enzima se satura al 50%, ustedes ven que es nada, se satura la enzima al 50% a una concentración de glucosa mínima. Eso me habla de que tiene una gran afinidad. En cambio, cuando ustedes ven la gráfica de la glucoquinasa, este es el 100% de saturación. Bajo acá, el 50% anda más o menos por aquí. Ustedes ven que la concentración de sustrato para la glucoquinasa anda entre el 5 y 10 más o menos milimol de glucosa en sangre. ¿Qué significa más? Significa menos afinidad.

Cuando pongo a estas dos enzimas juntas, lo que sucede es esto, que la exoquinasa va de manera muchísimo más rápida que la glucoquinasa. Y esto tiene biológicamente una explicación. La exoquinasa, como está en el músculo, el músculo es un órgano que necesita glucosa constantemente para moverse y no está bueno que la glucoquinasa se lo saque de manera rápida. La glucoquinasa está en el hígado, donde normalmente sí metaboliza glucosa, pero normalmente la utiliza, entre otras cosas, para ayudar a la formación de glucógeno. Entonces, sería muy loco que la glucoquinasa se quede con toda la glucosa del organismo en el hígado y el músculo no tenga cómo conseguir energía. Es por eso que el organismo, nuestro propio cuerpo, diseña enzimas que hacen lo mismo, pero le da prioridad a los órganos que necesitan glucosa para poder seguir con su metabolismo diario, ¿ta?

Entonces, cuando nosotros colocamos, insisto con esto, cuando nosotros colocamos a la glucoquinasa y a la exoquinasa juntas, van a ver acá arriba cómo las dos gráficas se forman de manera distinta. Cuando la exoquinasa termina su trabajo, la glucoquinasa recién va a por su sustrato. Y acá donde vemos nosotros los diferentes Km, acá lo tenemos más claro. ¿Ven? Acá la concentración de sustrato para la exoquinasa al 50% donde está saturada es muy chiquita, muy pequeña en comparación al Km de la glucoquinasa, este que tiene menos afinidad.

Entonces, como concepto principal, cuanto mayor Km, menor afinidad de la enzima por su sustrato.

Entonces, una de las cosas que pueden surgir, que nos pueden preguntar, es ponernos dos gráficas y de estas dos gráficas, bueno, marcar cuál es la verdadera y hacemos lo mismo. En este caso nos pide a ver cuál de las dos curvas tiene mayor o menor Km. Si uno ve la curva A, va al 50%, baja, tiene más o menos una concentración de sustrato de 1 milimol y cuando va a trazar el y va a hallar el Km de la curva B, se da cuenta que es el mismo. Ah, en este caso ambas curvas tienen el mismo Km, pero en este caso ustedes ven que el Km de la curva A es más grande que el de la curva B. Por ende, decimos que el de la curva A tiene más Km, por ende concluimos que tiene menos afinidad. Ah, acá tenemos el Km de la curva A es mayor que de la curva B. Son ejercicios que, bueno, nada, pueden surgir, que nos puedan llegar a preguntar y está bueno ir de alguna manera más sistematizada para ir a resolverlo.

Bien, tenemos que hablar de concepto de isoforma y de isoenzima, está. Tanto la isoforma o la isoenzima llevan adelante la misma reacción, pero tienen una diferencia. Por ejemplo, vamos a poner dos parénquimas totalmente diferentes: el músculo y el hígado. El músculo, cuando quiere metabolizar la glucosa, sintetiza la enzima exoquinasa. Acá la tenemos. Ustedes ven que estos circulitos, como dijimos que eran proteínas, esto tiende a simular aminoácidos con sus diferentes cargas, sus diferentes interacciones. Y por otro lado, el hígado hace lo mismo, pero sintetiza la glucoquinasa. Ustedes ven que los aminoácidos que tiene son distintos. Esta conformación distinta de aminoácidos, como tienen carga distinta, hacen que una de las diferencias entre las isoformas o isoenzimas sea que varíen en la carga. Como esta carga varía, puede hacer que la función de la enzima se vea aumentada o disminuida. Por eso influye en la afinidad. Y si yo tengo una carga distinta y le coloco un campo eléctrico para hacer una electroforesis, van a tener un movimiento distinto en la electroforesis. Está.

Cuando tenemos dos enzimas que hacen lo mismo, pero son sintetizadas en diferentes parénquimas porque utilizan cromosomas distintos, hablamos de que son isoenzimas. Ahora, ¿cuándo hablamos que son isoformas? Cuando para cumplir la misma función, la enzima original o la preenzima, por decirlo de alguna manera, sufre una modificación posttraduccional. Es decir, tengo la enzima que se sintetiza, pero para que sea activa tiene que recortarse, fosforilarse u oxidarse. La palabra isoforma es como una ayuda memoria porque tenemos que se fosforila, se oxida o se recorta. Esto es una isoforma, es una modificación transcripcional que tiene la enzima que le permite cumplir su función. ¿Qué modificaciones? Se recorta, se fosforila, se oxida. Se fosforila, se oxida, se recorta. Está. En la palabra isoforma están metidas estas tres modificaciones que se dan después de que la enzima se transcribe, ¿ya está?

Entonces, insisto con esto: isoenzimas son codificadas en cromosomas diferentes, tienen diferencia en la afinidad, en la carga y, por supuesto, en la electroforesis. Y una isoforma son modificaciones posttraduccionales de recorte, fosforilación u oxidación.

Ahora, nosotros en el laboratorio, ¿cómo medimos las enzimas? La podemos medir e informar en unidades de masa o informar según la actividad enzimática, es decir, ¿cuántos micromoles aparecen por minuto? Las primeras, las primeras son mucho más caras. Ah, normalmente no están disponibles. Se utilizan anticuerpos monoclonales específicos para poder medir las enzimas. Y acá la idea es la siguiente: la cubeta se coloca sangre del paciente donde está la enzima a medir y se colocan anticuerpos monoclonales. Entonces, el anticuerpo monoclonal va a ir directo a la enzima de interés y va a generar, en este caso, una turbidez. Puede generar una luz, en fin, va a generar una señal que esta señal es medida. Ah, en este caso puse la turbidez, es medida y después extrapola una curva de calibración y acá me dice la concentración de enzima en unidades de masa. Está. En este caso, en nanogramos/mililitro se utiliza poco. Lo que más utilizamos son es la actividad enzimática. Normalmente lo que hacemos es medir la aparición de un producto, pero también, como les voy a mostrar al final, puedo medir la disminución del sustrato.

¿Qué es lo que sucede? Acá les traigo el ejemplo de la fosfatasa alcalina. La fosfatasa alcalina es una enzima que yo quiero medir. Entonces les doy su sustrato, que es este que está acá, el p-nitrofenil fosfato, que la fosfatasa alcalina lo va a desdoblar a p-nitrofenolato. Entonces, cuando la enzima se encuentra con su sustrato, lo que sucede es que lo desdobla a producto. Se va a generar esta misma curva que nosotros ya aprendimos, que la descubrió Michaelis y Menten. Pero lo interesante de acá es que nosotros ya sabemos que vamos a medir acá en estos primeros minutos de la reacción. En estos primeros minutos que aparece el producto, el producto va a ser un producto coloreado que yo lo voy a poder medir, le voy a poder medir la absorbancia. Entonces, la absorbancia la extrapolo a una curva de calibración y me dice la cantidad de unidades internacionales que yo tengo que informar. La cantidad de unidades internacionales, que son las unidades en las cuales medimos las enzimas. Está. En este caso, puntualmente para la fosfatasa alcalina, el fabricante nos dice: tenés que medir a la cierta cantidad de minutos o a la cierta cantidad de segundos.

Otra forma que tenemos también de medir, esto, por supuesto, está escrito en los insertos y nosotros hacemos caso a esto. El fabricante nos puede diseñar una técnica de que sea de monitoreo continuo, de punto final o de dos puntos. ¿Qué significa esto? Bueno, conociendo, vieron que esta es exactamente la misma gráfica que hemos estado analizando, ¿verdad? El fabricante nos puede decir: "Bueno, tenemos que medir la absorbancia al minuto, a los dos, a los tres y a los 4 minutos." ¿Por qué? Porque él sabe, como descubrieron, insisto con esto, Michaelis-Menten, él sabe perfectamente que en esta fase lineal la cantidad de aparición del producto es proporcional a la cantidad de enzima. Entonces, nos dice: "Mida al minuto, a los dos, a los tres y a los 4 minutos." Esto se llama monitoreo continuo porque justamente estamos como monitorizando toda esta fase lineal. O también nos puede decir: "Mida dos veces o mida una sola." En caso de que nos diga que midamos una vez sola, por ejemplo, a los 4 minutos, se llama de punto final. O en caso de que nos diga: "Tenés que medir al minuto o a los 4 minutos", se denomina a dos puntos. Son dos maneras este que ustedes van a ver que los insertos lo mencionan.

Bien, nosotros podemos medir enzimas o, como hablamos en la primera diapositiva, podemos utilizar a las enzimas como reactivos. En este caso les traigo el ejemplo de los triglicéridos, donde yo para medir los triglicéridos necesito la ayuda de una enzima que me desdoble estos triglicéridos en estos productos, que estos productos en el laboratorio me es difícil medirlos, entonces las acoplo a una segunda reacción que me va a dar estos productos que no los puedo medir en el laboratorio, pero estos productos son sustrato de una tercera reacción que me genera un producto coloreado que este producto coloreado yo lo puedo medir en el laboratorio. Cuando tengo como estas interacciones de enzimas en escalón, si se quiere, decimos que son reacciones acopladas, donde el producto de una reacción es el sustrato de la siguiente.

Entonces, nos pueden preguntar: bueno, e, ¿cómo se llaman las diferentes enzimas? ¿Qué rol cumplen las diferentes enzimas? Entonces, la primera enzima siempre es la enzima principal, está. Se, justamente se denomina principal porque es la que está catalizando el sustrato que a mí me interesa. Después, todas las reacciones que aparecen en el medio se denominan enzimas auxiliares, y la última enzima, que es la que me da el producto coloreado la gran mayoría de las veces, se le llama enzima indicadora. Está, normalmente está en la última reacción. Entonces, enzima principal es en la que está la primera y cataliza el sustrato de interés. Enzima indicadora, es la que está en la última reacción y es justamente la que puede generarme el color que voy a medir. Y enzimas auxiliares, todas las que están entre medios.

Bien, tenemos que hablar de inhibidores competitivos o no competitivos. ¿Qué sucede? La enzima puede estar frente a algún fármaco, ¿no? Y su acción se ve, en ese caso, disminuida. Esto se hace en farmacología para poder disminuir la actividad enzimática, porque tenemos enzimas que no queremos que trabajen mucho. Entonces, se le llama inhibidor competitivo a justamente aquel inhibidor que compite por el sitio activo de la enzima.

Entonces, ¿qué pasa? Tenemos la enzima, en amarillo el sustrato habitual y en rojo el inhibidor competitivo. ¿Qué es lo que sucede? Hay moléculas, hay enzimas que van a ir por su sustrato habitual y lo van a desdoblar en producto, pero ¿qué pasa? Hay otras enzimas que, como el inhibidor competitivo es igual, ah, lo que hacen es unirse a este inhibidor competitivo. Por ende, obviamente no tengo productos, por ende la velocidad de formación del producto va a ser menor. Ah, ¿qué es lo que se destaca de esta gráfica? Es que cuando hay un inhibidor competitivo, la enzima, como prefiere al inhibidor competitivo, es de alguna manera como que me baje la afinidad. Entonces, si me baja la afinidad, me aumenta el Km, que es la diferencia, este, que es lo que sucede cuando nosotros tenemos un inhibidor competitivo en nuestra muestra. Ah, entonces, cosas a llevarse cuando tenemos un inhibidor competitivo: la enzima, acá le puse entre comillas "se confunde", pero para ponernos en la pista de que prefiere al sustrato, prefiere al inhibidor. Entonces, si yo prefiero al inhibidor, de alguna manera mi afinidad disminuye y si mi afinidad disminuye, me aumenta el Km. Ah, eso pasa con los inhibidores competitivos.

Con los inhibidores no competitivos surge otra cosa. El inhibidor no competitivo se une en otro lugar que no es el sitio activo. Ah, se une en otro lugar diferente. Entonces, acá lo que tenemos es lo siguiente: tenemos la enzima que va a ir por su sustrato y después tenemos al inhibidor no competitivo que se une, ustedes ven acá, en otro lugar que no es el sitio activo, se une en otro lugar. ¿Qué es lo que sucede? Eh, cuando está la enzima sola, la inactiva, pero también el inhibidor no competitivo actúa cuando la enzima tiene contacto con su sustrato, entonces lo que sucede es que no la deja formar producto. Entonces, de alguna manera es como que yo tuviera menos enzima. Si yo tengo menos enzima, entonces tengo menos velocidad, entonces esta es la curva que a mí me queda. ¿Me cambia el Km? No, no me cambia el Km porque en realidad la enzima no prefiere otro sustrato, la enzima está inactiva. Es la diferencia que tenemos con los inhibidores competitivos. Como cosa grande, el inhibidor no competitivo se une en otro lugar, está, diferente al sitio activo. Y el no competitivo no me afecta el Km y lo vemos en esta curva. Lo que sí genera el inhibidor no competitivo es una disminución de la velocidad máxima, porque en realidad es como que yo tuviera menos enzima trabajando porque está este está inactiva.

Ahora tenemos que estudiar un poquito dónde están las enzimas, porque en realidad uno saca sangre pensando que todas las enzimas están en la sangre, pero en realidad tenemos enzimas que están en el intracelular y en el intravascular. Las enzimas que están en la sangre son principalmente las proteínas de la coagulación. Tenemos en el endotelio vascular también la lipoproteína lipasa, la LCAT, que las vamos a ver más específicamente cuando veamos triglicéridos, pero están de manera constante. Y después en el intracelular tenemos enzimas citoplasmáticas, intramitocondriales y en los lisosomas. Está. ¿Qué sucede? La cantidad de enzima que hay en el intracelular es muchísimo más que la que hay en el intravascular. Entonces, ¿qué sucede cuando hay alguna célula que se rompe? Este gradiente de concentración favorece que todo lo que hay en el intracelular vaya hacia la sangre y nosotros la encontremos cuando hagamos la extracción.

Ahora, además de que porque la célula se rompa y vuelque todo su contenido a la sangre, hay otros motivos por los cuales uno puede encontrar la cantidad de enzimas elevadas. Acá voy a hacer un poquito de zoom para ver. Por supuesto, la necrosis da cuando se, como les comentaba hace nada, la ruptura celular hace que todo el citoplasma vuelque su contenido hacia la sangre. Hay enzimas que se inducen, por ejemplo, por alcohol, por fármacos que aumentan su concentración y nosotros la encontramos en sangre. Por ejemplo, podemos llegar a tener en algún lado alguna obstrucción, como por ejemplo los canalículos biliares y hay enzimas que por un tema de reflujo podemos encontrarlas nuevamente acá en la sangre. Podemos tener una menor eliminación de esas enzimas porque, bueno, no sé, falló el sistema de eliminación de esa enzima, entonces la encuentro también en sangre y cuando tenemos proliferaciones celulares, está, tenemos muchos más células mandando hacia la sangre enzimas.

Entonces, eh, las enzimas en sangre normalmente aumentan por todos estos factores. Los que más predominan son la necrosis, donde la célula se rompe, y la obstrucción. Ah, entonces acá, por ejemplo, les traigo cómo es la actividad enzimática de todas estas enzimas, de estas tres enzimas en los diferentes parénquimas. Ustedes ven que si comparamos la actividad enzimática de la AST, que está en el hígado, la actividad enzimática en el hígado es 7100 veces más que la actividad enzimática del suero. Es por eso que la utilizamos también como daño de injuria hepática. En su momento también se utilizó como marcador de injuria miocárdica. ¿Por qué? Porque los cardiomiocitos, cuando se necrosaban, liberaban a la circulación AST. Entonces, cualquier rotura celular está, aumenta la actividad enzimática de estas enzimas en sangre.

Y hay que tener mucho cuidado porque ustedes ven que, por ejemplo, la AST y la ALT están en los eritrocitos. Es por eso que una hemólisis yo debo rechazar la muestra, porque si tengo que medir estas enzimas en suero y el suero está hemolizado, por supuesto que me va a dar una actividad enzimática elevada y no es porque el paciente tenga algún problema, sino porque en realidad procesé una muestra hemolizada que no tendría que haberla procesado.

Entonces, cuando uno, esto lo hablamos incluso en la primera clase, cuando uno va a realizar la extracción tiene que tener en cuenta cuáles son los tubos que va a usar. Eh, para lo que es la actividad enzimática se prefiere suero y orina, porque tanto el citrato como el EDTA, como son dos anticoagulantes, para lograr su efecto de anticoagular la sangre es como que eliminan al calcio del medio. Y hoy hablamos que las enzimas para funcionar muchas veces necesitan iones y el calcio es uno de los iones que promueve que las enzimas funcionen correctamente. Entonces, si yo quiero medir una actividad enzimática en citrato o en EDTA, claramente la actividad enzimática va a estar disminuida porque le estoy sacando a la enzima su grupo prostético necesario para que ya pueda funcionar. Todo esto que yo le estoy comentando, igual, por supuesto, que está en los insertos.

Bien, vamos a hablar un poquito de estas enzimas que después, cuando veamos cada tema en particular, cuando veamos perfil hepático, vamos a tocar bastantes de ellas y cuando veamos algo de pancreatitis, vamos a tocar el tema de la amilasa y cuando veamos injuria miocárdica y cuando veamos también enzimograma muscular, vamos a hablar un poquito de la de la CK, de la creatina quinasa. Estos son títulos para que ustedes se queden con algo de las enzimas como más importantes o de las que medimos mayormente en el laboratorio.

¿Qué pasa de la CK? ¿Qué es lo que tenemos que saber de la CK? Que es una enzima que tiene dos subunidades, una subunidad M y una subunidad B. E, lo que hace puntualmente la creatina quinasa, todo lo que termina en quinasa es que pega grupos fósforo. ¿A quién? En este caso, a la creatina. La creatina es una proteína del músculo que la creatina quinasa lo que hace es pegarle un fósforo. Está. Cuando la creatina tiene un fósforo pegado, eh, de alguna.

Manera oficial de de ATP para darle al músculo, para que el músculo tenga una fuente de ATP si lo necesita más rápido. Esa es la función básicamente de la C, pegarle una un grupo fósforo al a la creatina.

¿Qué es lo que sucede? Eh, tengo dos sub tengo dos subunidades, por ende, tengo tres combinaciones. Está la combinación de la subunidad M con la B, que está principalmente en el corazón. Tengo la la subunidad MM y la subunidad BB. Está todo esto acá, vieron que acá está bajo el título de isoenzimas. Está se codifican en parénquimas distintos porque utilizan este este utilizan partes del genoma distintos.

¿Qué sucede cuando uno mide la actividad de la total? Porque la C total en realidad es la suma de estas, menos la del cerebro porque no pasa la barrera hematoencefálica. Cuando uno realiza la actividad de la C total, el 95% de dicha actividad corresponde al músculo. Ah, antiguamente y bueno, hasta el día de hoy menos, pero bueno, se sigue utilizando la CKMB como marcador de infarto miocárdico acompañado de la troponina. Tranqui, que esto lo vamos a ver cuando veamos este funcionalidad cardíaca.

Eh, cosas que tenemos que saber también que bueno, que aumentan la hemólisis y se utiliza mayor, no es que se utilice, pero por ejemplo, aumenta muchísimo cuando tenemos lesiones en los músculos, aplastamientos, rabdomiólisis, diferentes enfermedades musculares que justamente liberan CK al torrente sanguíneo. Y cuando uno la encuentra tiene la actividad enzimática de la C elevada y cuando uno hace un poquito de zoom, ve que la actividad enzimática de la CK está elevada, pero dominio de la MM.

¿Qué es lo que sucede en la cubeta? Esta es la reacción que el fabricante diseña. Nosotros lo que queremos medir es la actividad de la C. Está todo lo que yo les traigo acá es no para que se lo aprendan, sino para entender de una manera más didáctica lo que sucede en la cubeta. Esto que ustedes ven acá con con un recuadro verde es el reactivo.

¿Qué sucede? La CK que yo quiero medir le tengo que dar un sustrato, está. Le doy la fosfocreatina y el ADP. ¿Dónde están estos dos sustratos? En el reactivo. Obviamente, cuando yo mezclo muestra y reactivo, está todo junto. Pero acá vamos a verlo paso por paso para no entreverar. Quiero medir la C. Entonces le doy su sustrato, está. La enfrento con la fosfocreatina y el ADP. Entonces, acá tenemos la la creatinquinasa y acá tenemos cosas que el reactivo me aporta. Ah, ustedes ven acá que es una reacción acoplada, entonces ustedes ya pueden concluir que este producto yo no lo puedo medir. Entonces es sustrato de esta segunda reacción. Este producto yo no lo puedo medir, por ende es sustrato de una tercera reacción. Ya aprendemos o ya repasamos que esta es la enzima principal, enzima auxiliar y enzima indicadora. Entonces, la exoquinasa y la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa, ¿quién me las da? Acá las tengo, una en celeste y otra en verde. Me las da el reactivo. Está.

Entonces, vamos a ir paso por paso. La la fosfocreatina y el ADP, acá es lo que va a suceder. ¿Qué pasa? Genera dos eh productos, que es la creatina y el ATP. Ah, ustedes ven acá con los simbolitos que es la misma. Ni la creatina ni el ATP lo puedo medir, pero ¿qué pasa? La exoquinasa, cuando se encuentra con el ATP y con la glucosa que me la dio el reactivo, ella como que se pone activa y dice, "Bueno, es momento mío de trabajar." y va y ataca de alguna manera, por decirlo, y genera ADP y glucosa-6-fosfato. Está que no lo puedo medir en el laboratorio. Pero, ¿qué sucede? La glucosa-6-fosfato deshidrogenasa, que también está que está en el reactivo y ahora están formando parte de la reacción, dice, "Bueno, tengo mi sustrato que es la glucosa-6-fosfato y tengo NADP, pero ¿de dónde salió este NADP? Me lo dio el reactivo." Entonces ella se pone a trabajar. ¿Y qué es lo que genera estos dos productos? ¿Qué es lo que medimos nosotros? La aparición o mejor dicho, la absorbancia del NADPH. Medimos la absorbancia del NADPH y extrapolamos esa absorbancia a una curva de calibración y obtenemos la concentración de la creatinquinasa. Esto es lo que sucede en la cubeta visto con dibujitos.

Vamos a hablar un poquito ahora de la lactato deshidrogenasa. Es una enzima que está en todos lados, es ubicua, tiene varias isoformas de la 1 a la 5. Y en realidad no nos da mucha información si la interpretamos sola. Todas las enzimas nosotros las debemos interpretar o con un dato clínico o con muchas más enzimas para poder concluir. Está.

¿Qué debemos saber de la LDH? Bueno, si ustedes recuerdan cuando nosotros cuando la enzima introduc, cuando la enzima, no, cuando la célula introduce glucosa dentro de su citoplasma, se lleva a cabo la glucólisis, que es la transformación de la glucosa hasta piruvato. Este piruvato cuando hay oxígeno puede entrar al ciclo de Krebs, metabolizarse y generar energía, pero cuando no hay oxígeno forma lactato. ¿Quién es la encargada de hacer el pasaje de piruvato a lactato? La LDH. Pero la LDH juega para los dos lados porque tiene la capacidad de pasar de lactato a piruvato.

Con esto en mente, los fabricantes diseñan el siguiente test. Yo quiero medir la LDH, por ende le doy su sustrato, que cuál es su sustrato? El lactato. Acá ustedes lo que ven es que le voy a dar a la LDH lactato. ¿Con qué se lo doy? Con este una coenzima que es la coenzima NAD. Frente a esto, esto, frente a estos dos sustratos, la LDH se pone a trabajar y ¿qué es lo que forma? Forma piruvato y NADH. ¿Qué es lo que nosotros vamos a medir en el laboratorio? La aparición o la absorbancia del NADH y la vamos a extrapolar a una curva de calibración donde nos va a decir la este las unidades internacionales que tenemos que informar. Acá dice CK, pero debería de decir este LDH.

Ahora, ¿qué pasa? Como yo sé que esta enzima juega para los dos lados, los fabricantes se inventaron una cosa al revés. En vez de darle lactato y NAD, le dan piruvato y NADH. ¿Para qué? Para que ella forme lactato y NAD. Y ustedes dirán, "Bueno, entonces acá vamos a medir la aparición del NAD." Pues no, señores, como yo parto de una concentración conocida de NAD y la reacción hace que se consuma, yo puedo medir eh la puedo medir el consumo, puedo medir la disminución de la absorbancia. Entonces, se hace una curva de calibración que ustedes ven que es totalmente decreciente a diferencia de las que hemos visto, ¿está?

Entonces, acá donde venía lo que yo les comentaba, o medimos aparición de producto o medimos disminución de sustrato. Acá tenemos dos ejemplos como los fabricantes se dan la idea de que en una mido aparición de producto y en la otra mido desaparición de sustrato. ¿Está bien?

Esto de las eh transaminasas lo vamos a a profundizar mucho más cuando veamos funcionalidad hepática, pero tenemos que saber que eh están, como ya aprendimos, en el citoplasma de muchas células, están más concentradas en el hígado. Por ende, cuando eh tenemos una alteración hepática, una lesión celular hepática, estas enzimas se vuelcan a la sangre y yo la encuentro. Vamos a hablar más adelante cuál es el con dibujitos y demás, cuál es la función para que quede más claro, pero bueno, está transaminasas transfieren grupos este aminos, pero bueno, nada, vamos a dejarlo por ahí para profundizarlo mucho más cuando veamos funcionalidad hepática.

¿Qué es lo que sucede? E para hablar un poquito de la reacción, esto es más o menos lo mismo. Eh, lo único que hago es ponerle dibujitos para nada, eh, tratar de entenderlo mejor. Ustedes ven acá que quiero medir la GOT. La GOT es la ASAT que está en la muestra del paciente y yo le agrego, porque el reactivo así me lo provee, le agrego aspartato y oxalacetato. Cuando la enzima detecta estos dos sustratos, se pone a trabajar y genera oxalacetato y glutamato, que ustedes ya presuponen, como esto es acoplado, que este este producto yo no lo puedo medir, por ende es sustrato de esta segunda reacción. ¿Quién va a actuar? La malato deshidrogenasa. La malato deshidrogenasa que está en el reactivo detecta oxalacetato y NADH y hace su trabajo y convierte malato y NAD+. Al igual que la reacción anterior, yo no mido aparición de NAD+, sino que mido disminución de NADH y tenemos otra reacción decreciente de las tantas que tenemos en el laboratorio.

Otra de las enzimas que vamos a profundizar cuando veamos funcionalidad hepática es la gama GT. Vamos a estudiar dónde es que está, pero bueno, acá más o menos les muestro un pantallazo de lo que va a ser esa clase, por lo menos para entenderla. Ahora, la gama GT es una enzima que aumenta su concentración cuando requiere detoxificar algún fármaco o detoxificar sobre todo el alcohol. Pero, ¿qué sucede cuando yo tengo una obstrucción biliar? Por sea la causa que sea. La gama GT y la fosfatasa alcalina son dos enzimas que están en los canalículos biliares. Entonces, cuando hay un stop en alguna parte de los canalículos, toda la bilis vuelve hacia atrás y eso hace que la gama GT y fosfatasa alcalina de alguna manera pasen de los conductos biliares, deriven para la linfa y termine en lo que es la sangre y nosotros la podamos medir. Esto lo vamos a profundizar, ya les digo, cuando lo lo veamos específicamente, pero esto es lo que les mostraba. O sea, por un tema de de obstrucción. Y acá son las este las causas por las por las que está aumentada. Eh, obviamente que nadie les va a preguntar esto porque es dificilísimo hasta pronunciarlo, pero bueno, tenemos que saber que la gama GT, ¿no? Yo le tengo que dar un sustrato que obviamente va a ser el que está en el reactivo. Eh, la gama GT lo va a desdoblar y va a formar un producto que es el que yo voy a terminar midiendo la absorbancia. Está como siempre, medimos la absorbancia, la extrapolamos a una curva de calibración y obtenemos las unidades internacionales que nosotros debemos informar. ¿Está bien?

Seguimos. Fosfatasa alcalina, un poquito lo mismo que la la gama GT. E decir que además de que ya sabemos dónde se encuentran los canalículos biliares y demás, la fosfatasa alcalina también es sintetizada por la placenta y por e los huesos. Entonces, eh está bueno siempre cuando vamos a informar el resultado de una fosfatasa alcalina, ver frente a qué paciente estamos, porque puede estar alta y es normal en una embarazada, es normal en un adolescente que esté alto porque claramente está creciendo, este, pero bueno, eh, siempre cuando viene acompañado un dato clínico es mucho mejor para bueno, uno no está presuponiendo y entender qué es lo que está pasando. Está bien. El tema de proliferación celular tiene que ver con esto que yo les decía del hueso y como se encuentra en en los canalículos biliares ahí formando parte con formando al lado de la gama GT, cualquier obstrucción que tengan estos canalículos biliares, la fosfatasa alcalina la voy a encontrar en sangre.

Esta reacción la hemos visto a lo largo de esta clase, donde le coloco también un sustrato que está en el reactivo, la fosfatasa alcalina lo desdobla y lo que yo voy a terminar midiendo es la absorbancia de este producto coloreado en una curva de calibración nuevamente para eh poder este informar la la actividad enzimática.

Bien, colinesterasa. Vamos a hablar de la colinesterasa cuando veamos funcionalidad hepática y vamos a darle mucha atención cuando este hay organofosforados a la vuelta. Porque, ¿qué pasa? Los organofosforados que son utilizados en pesticidas eh inhiben a la colinesterasa, por ende, no puede cortar la acetilcolina. Y la acetilcolina tiene muchas funciones en el organismo, entre ellas la contracción muscular, entre ellas eh actuar sobre diferentes glándulas. Eh, otras funciones que tiene la acetilcolina es en hacer que el corazón se contraiga más lento. Entonces, por ejemplo, si yo no tengo colinesterasa, la acetilcolina no va a poder ser cortada, entonces va a estar actuando el más y si esto pasa en el corazón, un paciente, por ejemplo, va a venir con bradicardia. Está. E acá también les cuento, insisto con esto, esto es un pantallazo para porque estamos hablando de enzimas y tenemos que hablar de ellas, pero son títulos. Vamos a ver que hay dos tipos de enzima, una que está en el sistema nervioso central, otra que está más específicamente en la sangre, que se llama pseudocolinesterasa, que e la la cantidad de colinesterasa me da una buena pista de cómo está funcionando el el hígado. Entonces, nos nos vamos a no vamos a spoilear nada, vamos a dejar eh toda la la info de la colinesterasa para para esa clase.

Simplemente mostrarles también e qué es lo que sucede en la reacción. En este caso tenemos un sustrato que la colinesterasa lo desdobla, está y sobre todo la tiocolina cuando se encuentra con esta otra este esta otra sustancia que está en el reactivo hace que pase de +2 de +3 a +2. Entonces, como ustedes ven acá abajo, eh de alguna manera el hexanoferrato amarillo pasa a un color, o sea, pasa a ser prácticamente incoloro. Entonces, lo que yo eh estoy midiendo en definitiva es la disminución de la absorbancia. Porque si al principio tiene color y después se vuelve un producto incoloro, estoy midiendo la disminución de la absorbancia. Obviamente jugamos nuevamente con la curva de calibración y nos da la cantidad de enzima que tenemos que informar.

Bien, amilasa, eh amilasa pancreática, amilasa salival, normalmente se utiliza para el diagnóstico de pancreatitis. Vamos a ver la función de la amilasa cuando veamos sobre todo glúcidos, la función que tiene en cortar los enlaces 1-4 de los disacáridos, de las dextrosas para una mejor absorción de la glicemia, de la glucosa, perdón, de la molécula de glucosa. Y sí, cuando hay sospecha de pancreatitis, uno de los caballitos de batalla que se piden al laboratorio es la amilasa. Hay otra enzima que se llama lipasa, que está menos disponible, pero bueno, cuando veamos cuando veamos pancreatitis o funcionalidad pancreática, la vamos a nombrar.

¿Qué es lo que sucede? También le doy un sustrato, la amilasa lo desdobla. Ustedes ya pueden acá intuir que es una reacción acoplada, que tenemos la enzima principal y la enzima indicadora, donde e lo que se termina midiendo es la aparición de este producto también con una curva de calibración, extrapolo la absorbancia y obtengo la concentración.

Bien chicos, esto ha sido todo por hoy. Me parece super importante recordar, sobre todo en el laboratorio, la gráfica de Michaelis-Menten, está porque eso nos pone en la pista de por qué nosotros debemos darle a la enzima las condiciones necesarias para la cinética de orden cero. Eso me parece que es fundamental, saber explicarlo. Ah, eso creo que que es fundamental poder medulizarlo para poder entenderlo. Así que bueno, nada, quedo a las órdenes para lo que necesiten y bueno, nos vemos la próxima. Saludos para todos.