Transcription
السلام عليكم ورحمه الله وبركاته. معكم دكتور عبد الرحمن العتابي، وسكشن جديد بعنوان صبغ الجراثيم.
هناخذ النهارده سبور بطريقه الشيفر انفلتم. طبعا صبغه الجراثيم دوت من ضمن المجموعه أو طرق من الصبغات بنسميها الديران شاليستين أو الصبغه التفريقي. اتسمى بهذا المسمى لأنه دائمًا بيقسم البكتيريا وبيستخدم في تصنيف البكتيريا.
فعندنا أول تكنيك أخذناه من تكنيكات الدفرنستين هو الجرام ستيم، وده بيقسم البكتيريا لجرام بوستف بكتيريا وجرام نيجاتف بكتيريا. وعندنا لسبورس الثاني إلى سبور فورمينج بكتيريا ونان سبورت بكتيريا، أو بكتيريا بيكون جراثيم وبكتيريا غير مكونه للجراثيم. وهذه الخاصية، خاصية التكوين الجراثيم، بتفيد في تصنيف البكتيريا وفي تقسيم البكتيريا والتعرف على الأنواع البكتيريه والتفريق بينها وبين بعضها.
بيتعامل بأكثر من طريقة أو تقنية. الطريقة اللي احنا هنشتغل بها وهنعتمدها في المعمل بتاعنا اللي هي التكنيك ايه شفر وفيلتون، طريقة سهلة وبسيطة، وإن شاء الله نطبقها مع بعض.
بالنسبة للجراثيم، اه، إحنا المقصود هنا بصبغ الجراثيم أو سبور أخذناها أو اتشرحت في الجزء النظري. الجراثيم الداخلية ديه بتتميز أو إيه المميزات بتاعتها؟ أولًا، كل خليه يتكون جرثومه واحده فقط داخل الخليه. الجرثومه ديه هي للمقاومة الظروف الغير ملائمه وليست للتكاثر. يبقى هي فور سيستنس نوت برودكشن، ما هياش بهدف التكاثر، وإنما هي بهدف مقاومه الظروف الغير مقاومه الظروف الغير ملائمه.
بيرجع إلى التركيب الفريد للجرثومه المختلف كلياته عن البيجاتيف أو الخليه الخضاريه. إن عندنا السيتوبلازم بتاع الجرثومه بيبقى ده هيدريتد أو مجفف، لأن بيتراكم فيه دايت بكرينيك اسيد أو الكالسيوم بيتراكم جوه السيتوبلازم، فبيعمل تقليل لكميه الميه داخل السيتوبلازم، فبيعمل ده هيدريشن الخليه أو تجفيف للخليه. كذلك مجموعه من الأغلفه المميزه للجرثومه، أهمها واللي بيكسب الجرثومه صفه المقاومه الكورتيكس أو القشره، اللي هي أصلًا غنيه برده بالكالسيوم داي بكلنيت، وديت بيكسبها صفه المقاومه للحراره. وعندنا بعد كده الـ همم الكوت الاسبورت أو الغلاف الجرثومي، والغلاف الجرسومي دوت بيتكون من نوع من البروتين المقاوم للانزيمات اللي هو الكيراتين، مقاوم لفعل الإنزيمات. وفي حاجة اسمها الغشاء الخارجي بقى أو البتاع الجرثومه، وده بتبقى برده مقاوم لفعل المواد السامه أو الكيماويات السامه.
في الجرثومه بتبقى مقاومه للكيماويات السامه والمطهرات، وبتبقى مقاومه لعمل الإنزيمات ومقاومه للحراره ومقاومه للجفاف، وتظل كامله أو ساكنه لفترات طويله. طبعا الاكسسبوريوم بره عشان مقاومه المواد الكيماويه السامه، وعندنا السبور كوت أو اللي بيتكون من همم بيتكون بيتكون من بروتين مقاوم لفعل الإنزيمات عشان يحمي الطبقه الداخليه، لأن الطبقه الداخليه اللي هي عباره عن كورتكس أو القشره هي عباره عن كلير أو طبقه سميكه وداخل فئه مترقم فيه الكالسيوم، والطبقه ديت لا تقاوم فعل الإنزيمات، فلازم يبقى في بره طبقات تقام فيها الإنزيمات وفعل المواد السامه. وعندنا السبور وول البتاع جدار بتاع الجرثومه هو بيتكون العادي اللي هو بيتكون جدار أصلًا من الخليه اللي هو هيبقى الجدار الجرثومه بعد كده.
الجرثومه سيتوبلازم بتاعها والبوتوبلازم بتاعها متماسك لقله محتار من الميه، أغلفه عديده، فبالتالي هذه الجرثومه بتقاوم الصبغ بطرق العاديه. إيه بتقاوم الصبه؟ يعني أنا لو جيت أعمل سيم بلاي ستين، باحط الصبغه على شريحه فيها جراثيم، الـ الـ الصبغه ما تقدرش تدخل جوه الجرثومه. خلاص. لو في خلايا، الخلايا بتتصبغ، إنما الجراثيم ما بتتصبغش. فلو صبغنا بكتيريا متدرسمه بلسم بلستين مثلًا بالفوكسين ولا حاجة، فبلاقي أن الخلايا الخضريه أو البيجو أخذت اللون الأحمر، إنما بتظل الجراثيم بدون صبغ، وبتظهر لامعه تحت الميكروسكوب. لامعه لأن هي بتكتسب صفه إيه بتكتسب صفات ضوئيه، أن هي بتقدر تعكس الضوء، فبتبان لامعه تحت الميكروسكوب.
يبقى إحنا عندنا الجراثيم الداخلية بتبقى أجسام ذات جدري غليظه، بتكونها بعض أنواع من البكتيريا، واحده في كل خليه، فهي هنا بهدف المقاومه للظروف الغير ملائمه وليست تكاثر. أقل قابليه للصبغه عن الخلايا الخضريه، لأن الجدار بتاعها سميك والبروتوبلازم بتاعها متماسك نتيجه نقص الماء فيه، وده جاي نتيجه تراكم همم الكالسيوم أو أملاح الكالسيوم لحامض. فبالتالي لا تصبح بسببغات العاديه، وبتظهر كبقع رائقه لامعه في وسط الخليه، وبتصبغ باقي الخليه باللون الصبغه المستخدم.
ولذلك بقى علشان أصبغ الجراثيم، أنا عايز أصبه الجرثومه بقى، هنا بستخدم صبغات مركزه مع التسخين، مع التسخين عشان أقدر أدخل الصبغه جوه الجرثومه، فلازم أسخن الصبغه تمام. طب هنا بقى لما بعد بعد ما الصبغه بتكتسب، بعد ما الجرثومه بتكتسب لون الصبغه، صعب أن أنا أطلع منها الصبغه ثاني. تمام؟ طب تحتفظ بالصبغه وتعذر إزالتها منها مرة أخرى. خلاص.
يبقى أنا عشان أصبع الجراثيم تستخدم صبغه مركزه مع التسخين عشان أقدر أدخل الصبغه جوه الجرثومه. طبعا في جزء كده برده بنقوله قد يكون شرح في الجزء النظري، بس بنقوله برده أن الجراثيم إحنا قلنا أن بنستفيد منها في الوضع التقسيمي للبكتيريا أو لتقسيم البكتيريا، مش بس من البكتيريا لمكونه للجراثيم وغير مكونه للجراثيم اللي هي برفان بكتيريا سبور.
خلاص، ما تقلبتكال وتر من بيضاوي طرفي، أو ممكن تكون أسطوانيه وطرفيه، برده ممكن تكون يعني تحت الطرف بشويه، يعني مش على الطرف خالص، لا تحت الطرف بشويه. فممكن تكون الجرثومه السلندريكا الان سابتيرمينال، ممكن تكون جرثومه سلندر أو أسطوانيه والسنترا المركزيه في وسط الخليه، ممكن تكون الجرثومه وطرفيه، ممكن تكون سنه أو إيه مركزيه في وسط الخليه. المجموعه اللي إحنا قولناها دي كلها بتتفق في صفه واحده أن هي الجرثومه حجمها أصغر من حجم الخليه.
يبقى أنا عندي شكل الجرثومه ممكن يختلف من نوع لآخر، موضع الجرثومه بيختلف من نوع الآخر، حجم الجرثومه بيختلف من نوع الآخر، ولذلك بنستخدم الجراثيم في تصنيف الـ إيه البكتيريا. حتى إحنا قلنا أن في بكتيريا مترسمه وبكتريا غير مترسمه. طب المتجسمه بقى بنشوف مواصفات الجرثومه أو الكاركترازيشن بتاعتها، بنشوف موضوعها داخل الخليه، بنشوف حجمها بالنسبه للخليه، بنشوف شكلها، شكل الجرثومه إيه بالضبط.
فعندنا بقى ممكن تكون آخر حاجة اللي هي الالبتكال أو اوفال اللي هي البيضاءويه، وبتكون ترمينال ولرجر دانس يعني أكبر من حجم الخليه، وبتسبب أو بتحدث انبعاج في الخليه. وبصراحة، همم النوع ده بالذات مميز لنوع من البكتيريا اسمها كوليستريديانتي ثاني، بتبقى مميزه بهذا همم الشكل. بيسموها الضم شاب بالضم، اللي هي العصايه بتاعة الطبله. يعني لما نشوف همم شكل الخلايا بتاعة الكوليستريديوم تيتاني تحت الميكروسكوب، فبنشوفها شكل عصيان بتاعة الطبله، عصيان بتاعة الطبله صغيره كده أن هي منتفخه عصايه وفيها انتفاخ في الآخر، فبنسميها دمبتك شيب أو شكل عصايه الـ.
فده بالنسبه لشكل الجرثومه سبور شيب والموضع الجرثومه سبور داخل الخليه. بنقسم البكتيريا على حسب قدرتها على تكوين الجراثيم. الاسبوع من فورمينج باكتيريا يعني بكتيريا غير مكرونه للجراثين، زي الصوديوم فلورسنس، ما بيكونش جراسيل. وديت بكتيريا السالبه للجرام. سبورت 4 يعني أنا ممكن ألاقي بكتيريا سالبه وممكن ألاقي بكتيريا موجبه الجرام وبتكونش إيه الجرسين. البكتيريا الكرويه اللي هي سبيريكال أو الكوكاي في غالبا هي ما بتكونش جراثيم. إنما اللي بيتكون الجراثيم بتبقى رد أو بصلايه إلى بكتيريا البكتيريا العصبيه. هل كل العصبيه بتكون جرسين؟ الاسبوع يعني إيه نوع ثانية؟
عندنا بقى ملحوظة هامة بقى أن البكتيريا السالبه لغرام كلها ما بتكونش إندوسبورتس أو الجراثيم داخلي. إنما مين اللي بيتكون الويندوز هو بعض أنواع البكتيريا الموجبه لجرام. مش كل البكتيريا الموجبه للجرام بتكون سبورت. تمام؟ لا تكون سبورت. طب مين اللي بيكون سبورت؟ بعض أنواع البكتيريا الموجبه لجرام. فا إحنا عندنا الكوليسترجام هتلاقي الجرام بوست البكتيريا، يعني أنواع البكتيريا الموجبه.
التكنيك اللي إحنا بنشتغل عليه النهارده هو تكنيك شيفرو فايلتون أو تكنيك. وتكنيك دوت بيتلخص أن أنا بستخدم البرايمر 10 اللي هي الأخضر لمده خمس دقائق مع الـ إيه مع التسخين. وأنا كاتب هنا جنت الهيد أو التسخين الهيل يعني بالراحه عشان برده يعني إيه ما نحرقش الشاشه. خلاص. فإنا بنتجنب بولينج اندرايمون والتسخين لمده خمس دقائق مع مراعاه عدم الغليان. بغسل الأخضر تمامًا من على الشريحه وبستخدم مضاده اللي هي الفوكسين أو رنين. وهتلاقيني أنا ملون دي باللون الأخضر وملون دي باللون الأحمر، لأن الأخضر ملاقيه لونها أخضر والفوكسين لونها أحمر. الملاحظة هنا الفوكسين باصبغ به فقط لمده نصف دقيقه بدون تسخين. يبقى الصبغه الأولى بسخنها، الصبغه الثانيه ما بسخنهاش. الصبغه الأولى بسخنها بس الصبغه ما تغليش مني وما تنشفش مني على الشريحه. الصبغه الثانيه استخدمها لمده نصف دقيقه فقط بدون إيه بدون تسخين.
طب أنا بعد ما أعمل التكنيك ده إيه اللي هيظهر؟ دي الخطوات بتاعة العمل. الناس هتاخذها سكرين شوت تمام عشان تبقى معك برده في المعمل. بعد ما بعمل الشريحه دي، الشريحه المفروض تظهر بالشكل ده. هنا هاشوف إيه؟ هنا هاشوف ثلاث أشكال. هاشوف أو خليه خضريه باللون الأحمر، اللي هي الخلايا الخضريه اللي أنت شايفها باللون الأحمر دي، دي عباره عن إيه؟ وبتاخذ اللون الصبغه المضاده للكونترزتين باللون الأحمر. تمام. وهاشوف سبورز باللون الأخضر، الصغيره ده عيب باللون الأخضر، ديت الجراثيم الفريس بولز. الجرثومه اللي طلعت بره الخليج. تمام. الأخضر في كيس لونه أحمر سبونجي. أصلا الكيس الجرسومي. فإنا بشوف لو جينا نبص مثلا ندقق كده، يعني هو تلاقي الجرثومه دهيت جوه خليه، الخليه أو بقايا الخليه واخده اللون الأحمر. هنا ما بقتش خليه، هنا بقت كيس جرثومي، لأن هي في الحاله ديت ما عدتش بتبقى نشطه، مش مش هتتكاثر ولا هتتكسر خلاص، وهتتحلل بقيه الخليه بعد كده. فالجرثومه باللون الأخضر وبقيه الخليه باللون الأحمر. وأنا الخليه ما بقتش اسمها الخليه، بقى اسمها إيه؟ اسبران جيم أو كيس جرثومي. وديت برده هنلاقيها منتشره في زي ديت منتشره في الشرقيه. يبقى أنا في الشريحه ثلاث حاجات: في جاتا تفصل باللون الأحمر، سبور باللون الأخضر داخل كيس باللون الـ إيه باللون الأحمر. ده بالنسبه للشرح بتاع السكشن بتاع النهارده. هنشوف بقى الفيديو بتاع الشغل العملي.
السلام عليكم ورحمه الله وبركاته. [موسيقى] همم في التكنيك دوت بنستخدمها مده الصدر بتاعتها لمده خمس دقائق مع التسخين، لأن إحنا عندنا الجرسومه همم بتقاوم الطرق العاديه، فلازم همم بنستخدم صفحه مركزه مع التسخين علشان الصفقه دي تقدر تدخل جوه الجرثومه. والصبغه المضاده بتاعتها إيه؟ أو الكمبيوتر. في البدايه خالص إحنا عشان نعمل الشريحه، قلنا أول حاجة بنعملها أن أنا بانظف الشريحه. همم واستخدم ورقة البفره يكون أحسن. وبعدين بامررها كلها بالازرق مرتين ثلاثة. وبعدين بحط نقطة نقطة ميه صغيرة على شريحه عشان أنا هاشتغل من سونيك كالسيوم. إحنا نشتغل بيها المرة دي صورة كاتشر فيها. بحط نقطة ميه على الـ إيه علشان تبقى أكد عليه أن إحنا بنمسك الاستاند لثلاث صوابع بحيث النمو كله يكون ظاهر. وعندي إبرة التلقيح. تمام. لو إبرة التلقيح بتاعتك الـ الـ الـ السلك بتاعها معوج ولا حاجة، ببساطة شديدة أنت ممكن تعتله قبل ما تستخدمه. باعقم الإبرة في قلها لدرجة الاحمرار. تمام. وبعدين عندي الثلاث صوابع دول بمسك بيهم البلاك. بفتح الأنبوبة بعقم في وقت الأنبوبة كلها. وعندي النمو الأبيض اللي على سطح البيئة هو ده اللي أنا بأخذ منه جزء صغير. لمسة صغيرة من النمو الأبيض ده. لمسة صغيرة مش هناخذ كثير ولا حاجة. وبعدين معقم الأنبوبة ثاني وأقفلها. خلاص. بمزج الجزء اللي أنا أخذته ده في نقطة الميه دي كويس جدا بحيث أن أنا أشوف الميه اتعكرت. أنزل الجزء ده كويس جدا مع نقطة الميه اللي موجودة بحيث أن أنا أشوف الميه دي تعقرت. بقى في تربيه ثاني وبسيبها في مكانها. وبعدين أنا طول الوقت ماسك الشريحه بايدي. بعد كده باجيبها التسخين أعلى اللهب. ما نقربش من اللهب قوي علشان الغشاء بتاعي ما إيه ما يتحرقش. كده الغشاء معي أهوت. بعدين بمرر الغشاء في اللهب الأزرق برده مرتين ثلاثة. ده عشان نعمل فكستيشن. هنا أنا بمسك الشريحه بايدي بحيث أن الشريحه لا سخنه. لازم أسيبها تهدي خالص. ما أحطش الصبغه على الشريحه وهي سخنه. ودي حاجة من الغلطات اللي الناس إيه الناس بتعملها أن هي تحط الصبغه على الشريحه وهي ساخنه. كده الخطوة الأولى من خطوة من خطوات الصبر اللي هي همم ريبريشن والبكتيريا السمير أو تحضير الغشاء البكتيريا. نيجي بقى للتكنيك الصبر. الصبغه هنا أخضر الملقيت أو الماركيد جرين. هاحطها على الغشاء بتاعي لمده خمس دقائق مع مع التسخين. مع مراعات عدم جفاف أو غليان الصبغه. فإنا هاحط الصبغه على الغشاء مش هنحط نقطة ولا اثنين بقى. لا ده أنا هزود شوية. تمام. بعدين هامسك بالمشبك وبعدين أثبت إيدي على اللحم. هنا براعم أن الصبغه ما تغليش دي رقم واحد. ثاني حاجة أن الصبغه ما تنشفش على الشريحه. فبفضل حاطط إيدي على الله كده تسخين خفيف. الصبغه هيبدأ يطلع منها أبخره. هنا أبدأ أعد على الأقل لمده ثلاث دقائق. دقايق من خروج الأبخرة دي. لو الصبغه بدأت تنشف معي هازود. لو الصبغه بدأت تغلي معي هابعد إيدي لغايه ما تهدى شوية. يبقى أنا حاطط إيدي لمده قد إيه؟ لمده خمس دقائق. بحسب على الأقل ثلاث دقائق من خروج الأبخرة. بدأت تنشف هزود صبغه. لو الصبغه غليت بابعد يدي عن الـ إيه. خلاص. الكلام ده لايه. خلاص. تقريبا كده الخمس دقائق بتوعي خلصوا. برده في ملاحظة في ملاحظة أنا أخلي الصبغه بعيد عن المشبك. لأن لو المشبك ده بدأ يلمس الصبغه هيلم الصبغه كلها وهيوقعها على الأرض. فإنت تخلي الغشاء بتاعك في المنطقة اللي في النص والصبغه بعيد عن الـ إيه عن المشبك ما توصلش لـ إيه لـ المشبك. تمام. دي الملاحظات اللي إحنا لازم ناخذ بالنا منها. طبعا بفرد فوطه تحت اللهب دوت عشان لو وقعت حاجة ولا حاجة. الأساسية باغسل الزيادة من الصبر. وهنا هاغسل شوية كثار يعني لغايه ما الصبغه كلها إيه الزيادة من الصبغه كلها تنزل شوية. طيب مش عايزين بواقي من الصبغه على الشريحه. بعد ما غسلت كل الزيادة من الصبغه خلاص بصبغ بالصبغه المضاده الكونتر ستين اللي هي الفوكسين. بحط نقطتين من الصبغه عادي والمده نصف دقيقه. إحنا اشتغلنا بالفوكسين قبل كده. تمام. أعد نصف دقيقه. بعد كده بغسل برده الفوكسين الزيادة من فوكسين باغسلها وبادفت الشريحه. ما فيش عليها أي بقايا من الصبغه بتاعت. أفضل الصلاه والسلام. [موسيقى] شكرا جزيلا.